Survivin-siRNA誘導人乳腺癌細胞(MCF-7)凋亡研究.pdf

1、目的：將針對survivin基因的兩段RNA干擾序列(pGenesil-8-siRNA-survivin2，pGenesil-8-siRNA-survivin10)分別轉染及共轉染人乳腺癌細胞MCF-7，研究其沉默survivin基因的表達及其誘導腫瘤細胞凋亡的效應。 方法：以survivin基因為靶點，應用脂質體轉染技術，將構建的兩段RNA干擾序列分別轉染及共轉染人乳腺癌細胞MCF-7，通過激光共聚焦顯微鏡觀察轉染效率；采用r

2、eal-time PCR方法檢測細胞內survivin基因mRNA水平的表達變化；利用Western-blotting檢測細胞內survivin蛋白表達變化；應用Annexin-V-cy5/7AAD雙染后流式細胞術(FCM)檢測細胞凋亡率；MTT法檢測細胞增殖效應。 結果：體外細胞模型研究結果表明：①轉染pGenesil-8-siRNA-survivin2組，pGenesil-8-siRNA-survivin10組及共轉染組(p

3、Genesil-8-siR-NA-survivin2/survivin10)與對照組相比，survivin基因的mRNA表達水平顯著降低，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10組survivin基因的mRNA表達水平較其他組降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2組與pGenesil-8-siRNA-survivin10組之間無顯著差異；②轉染pGenesil-8-siRNA-surviv

4、in2組或pGenesil-8-siRNA-survivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組survivin基因的蛋白表達水平顯著降低，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組survivin基因的蛋白表達水平較其他組降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2組與pGenesil-8-siRNA-survivin10組比較無

5、顯著差異；③轉染pGenesil-8-siRNA-survivin2組或pGenesil-8-siRNA-sur-vivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組人腫瘤細胞凋亡率顯著增加，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10組人腫瘤細胞凋亡率增加最多，pGenesil-8-survivin2組與pGenesil-8-survivin10組比較無顯著差異；④pGe

6、nesil-8-siRNA-sur-vivin2組或pGenesil-8-siRNA-survivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/sur-vivin10組可抑制人腫瘤細胞增殖，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組的抑制作用最強。 結論：針對survivin基因的兩段RNA干擾序列能夠沉默MCF-7 survivin基因的表達，增加腫瘤細胞的凋亡同時抑