血必凈注射液對(duì)離體大鼠缺血再灌注損傷心肌中白介素-1β的影響.pdf

1、目的： 心肌缺血再灌注損傷是臨床實(shí)踐中常見(jiàn)的組織器官損傷，其準(zhǔn)確機(jī)制仍不十分清楚。研究結(jié)果表明心肌缺血再灌注損傷是一種急性炎癥反應(yīng)，缺血再灌注時(shí)心肌組織白介素—1β(IL-1β)產(chǎn)生增加是導(dǎo)致心臟功能障礙和心肌細(xì)胞壞死的重要原因之一，抑制IL-1β的產(chǎn)生能減輕心肌細(xì)胞損傷、有助于缺血心肌功能的恢復(fù)。近年來(lái)，中藥防治心肌缺血再灌注損傷的研究取得了一定進(jìn)展。血必凈注射液是從36組中藥處方中篩選而來(lái)，具有調(diào)節(jié)免疫及炎性介質(zhì)、改善微循環(huán)

2、、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗細(xì)菌毒素、降低內(nèi)毒素水平的作用。本研究應(yīng)用Langendorff離體心臟工作模型，觀察血必凈注射液對(duì)心肌缺血再灌注損傷中炎性細(xì)胞因子IL-1β的影響，并探討其減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷可能的機(jī)制。 材料與方法： 選擇健康Wistar大鼠30只，體重200±20g，雌雄不限，按隨機(jī)化原則分成對(duì)照組與血必凈組，每組15只。實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉，腹腔注射肝素鈉抗凝。開(kāi)胸并迅速取出心臟，立即浸

3、入4℃K—H液中，經(jīng)主動(dòng)脈插管以后連接于langendorff離體心臟灌注裝置上，以37℃K—H液灌注，灌注壓恒定為75cmH2O。經(jīng)15min的自然灌注平衡后，對(duì)照組用ThomasⅡ停搏液停搏，血必凈組用含有血必凈注射液的ThomasⅡ停搏液進(jìn)行停搏(100ml ThomasⅡ停搏液中加4ml血必凈注射液)。兩組心臟經(jīng)常溫(37℃)缺血30min后，以37℃K—H液再灌注至復(fù)灌后120min。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別計(jì)量缺血前10-15min、

4、缺血再灌注55—60min、缺血再灌注115—120min的冠脈流出液流量(CF)，并留取各時(shí)間段冠脈流出液3ml，放入—20℃冰箱內(nèi)保存，后用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)肌酸激酶(CK)含量；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后留取部分左心室心尖部心肌組織立即放入10％福爾馬林溶液中，固定20小時(shí)(4℃冰箱內(nèi)保存)后制成蠟塊標(biāo)本，于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌形態(tài)學(xué)變化；另取部分左心室心肌于—70℃冰箱冰凍保存，采用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)測(cè)定心肌缺血再灌注120minIL

5、-1β含量；采用硫代巴比妥酸法(TBA)測(cè)量心肌缺血再灌注120min丙二醛(MDA)的含量。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，兩兩比較用多重比較t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、CF的變化：與對(duì)照組相比，血必凈組缺血再灌注以后各時(shí)間點(diǎn)的CF值明顯升高(P<0.05)。 2、冠脈流出液中CK的變化：與對(duì)照組相比，

6、血必凈組缺血再灌注以后各時(shí)間點(diǎn)的CK值明顯降低(P<0.05)。 3、心肌形態(tài)學(xué)變化：對(duì)照組心肌組織有較多的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥反應(yīng)較明顯；血必凈組心肌細(xì)胞形態(tài)基本正常，心肌組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較少，炎癥反應(yīng)較輕。 4、心肌組織的MDA的濃度的變化：與對(duì)照組對(duì)比，血必凈組心肌缺血再灌注120min MDA的值明顯降低(P<0.05)。 5、心肌組織的IL-1β濃度變化：與對(duì)照組相比，血必凈組心肌缺血再灌注120min的

7、IL-1β含量明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1、血必凈注射液可以增加缺血再灌注后心肌的CF，從而增加心肌微循環(huán)灌注減輕心肌細(xì)胞缺血再灌注后的損傷。 2、血必凈注射液可以減少缺血再灌注心肌的冠脈回流液中CK的含量，及心肌組織中MDA的含量，說(shuō)明血必凈注射液對(duì)大鼠缺血再灌注后心肌有一定的保護(hù)作用。 3、血必凈注射液可以顯著減少缺血再灌注心肌組織IL-1β的生成，說(shuō)明血必凈注射液的心肌保護(hù)作用機(jī)制可能是通