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1、目的:觀察腹腔重復(fù)注射COX抑制劑氟比洛芬酯對(duì)大鼠骨癌痛的影響,探討脊髓水平COX2在大鼠骨癌痛發(fā)生中的作用。
方法:69只雌性SD大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(S組,n=24),腫瘤對(duì)照組(T組,n=30),氟比洛芬酯組(Fa組,n=15)。將含4×105個(gè)walker256細(xì)胞的PBS液注射到大鼠左側(cè)脛骨骨髓腔內(nèi),制作骨癌痛模型,假手術(shù)組注入不含腫瘤細(xì)胞的磷酸鹽緩沖生理鹽水(Phosphate buffered saline
2、,PBS)液。Fa組于術(shù)后第15天到21天,每天腹腔注射10 mg/kg的氟比洛芬酯,用于和Fa組對(duì)照的S組和T組于同一時(shí)間注射等體積的生理鹽水。每組隨機(jī)抽取6只動(dòng)物,于術(shù)前1d,術(shù)后1、3、5、7、10、14、15、17、19、21、24d檢測(cè)大鼠左足底機(jī)械縮足閾值(Pawwithdrawal mechanical threshold,PWMT)。于接種腫瘤細(xì)胞后第24d經(jīng)腹主動(dòng)脈取血測(cè)定肝腎功能、血小板及出凝血時(shí)間,取肝臟、腎臟及腫
3、瘤側(cè)后肢脛骨,HE染色觀察肝腎組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)及脛骨內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。然后,腫瘤對(duì)照組進(jìn)一步分為6組(n=3):T0(腫瘤細(xì)胞接種前1d),T5(接種后5天),T7(接種前7d),T14(接種后14d),T21(接種后21d);其余組根據(jù)給藥后觀察時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后14d、21d、24d),每組(n=3),在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物,取左側(cè)脊髓背角L3-5部分,用Westernblot的方法檢測(cè)脊髓COX2的表達(dá)。
結(jié)果:(1)接種前1d,T組
4、和S組之間PWMT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;從第5d開(kāi)始,T組(6.18±1.33)g PWMT顯著降低,低于基礎(chǔ)值及S組(11.88±1.80)g水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),大鼠的痛行為學(xué)隨時(shí)間逐漸加重;(2)腫瘤側(cè)脛骨病理組織學(xué)檢查:光鏡下觀察,模型組(HE染色)24天大鼠注射側(cè)脛骨骨髓腔內(nèi)腫瘤細(xì)胞彌漫分布,腫瘤細(xì)胞呈上皮樣,核分裂象易見(jiàn),部分細(xì)胞核可見(jiàn)核仁;(3)大鼠脊髓水平COX2,T7(0.51±0.01)組較T0(0.4
5、1±0.02)組和S21組(0.37+0.06)相比顯著增高(P<0.05),這種增高在T14(0.63±0.05)、T21(0.75±0.02)組仍持續(xù)存在(P<0.05);(4)接種后第17d開(kāi)始,F(xiàn)a組大鼠PWMT(6.64±1.70)g明顯升高,高于T組(4.06±1.69)g,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);后Fa組持續(xù)升高,第21d時(shí)Fa組PWMT(8.04±0.81)g,但未能恢復(fù)到S組水平(10.31±1.35)g(P
6、<0.05),這種鎮(zhèn)痛作用在第24天已不存在;(5)接種后第21天,F(xiàn)a21組(0.48±0.01)與T21組(0.58±0.01)比較大鼠脊髓水平COX2的表達(dá)明顯降低(P<0.05)。接種后24天,F(xiàn)a24(0.64±0.02)組與T24(0.68±0.02)比較無(wú)明顯差異(P>0.05);(6)S組、T組及Fa組這三組的肝功能(AST、ALT、TP)和腎功能(UREA、CREA、URIC)及血小板(PLT)及出凝血四項(xiàng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)
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