HIF-1α、Ang-2在酸中毒誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管異常增生中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:建立酸中毒誘導(dǎo)早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病大鼠動(dòng)物(Acidosis—induced retinopathy AIR)模型,觀察缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血管生成素-2(Ang-2)在正常新生大鼠及ROP模型大鼠(AIR)視網(wǎng)膜中的表達(dá)變化,探討二者表達(dá)變化與酸中毒的關(guān)系,對(duì)視網(wǎng)膜血管發(fā)育以及在酸中毒誘導(dǎo)ROP進(jìn)程中的作用。
　　 方法:將120只新生Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)隨機(jī)分為酸中毒實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,將

2、其60只從出生后第2天開始按535 mg／kg.d的劑量管飼NH4Cl(濃度為50mg／ml),每天2次,連續(xù)6天,然后進(jìn)入恢復(fù)期0-12天；另選60只作為對(duì)照組。兩組大鼠分別于出生后第3、5、8、10、13、20日齡處死,取左眼球用ADP酶組織化學(xué)染色法觀察視網(wǎng)膜血管的改變；取右眼通過(guò)常規(guī)HE染色定量反映視網(wǎng)膜血管增生情況；用免疫組化方法進(jìn)行HIF-1α和Ang-2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:視網(wǎng)膜鋪片ADP酶染色法顯示酸中毒實(shí)

3、驗(yàn)組8日齡鼠視網(wǎng)膜血管明顯收縮、阻塞,視網(wǎng)膜出現(xiàn)大片無(wú)灌注區(qū)；10日齡時(shí)可見(jiàn)大血管擴(kuò)張、迂曲、大量新生血管形成,周邊可見(jiàn)無(wú)灌注區(qū)；13日齡時(shí)血管仍擴(kuò)張,但新生血管結(jié)構(gòu)及分布紊亂。HE染色可見(jiàn)酸中毒實(shí)驗(yàn)組10日齡突破內(nèi)界膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核顯著高于同齡對(duì)照組,分別為(28.78±7.53)與(1.22±1.48)個(gè),p<0.001。免疫組化結(jié)果顯示:酸中毒實(shí)驗(yàn)組8日齡時(shí)視網(wǎng)膜組織中可見(jiàn)散在HIF-1α的陽(yáng)性表達(dá)；10日齡時(shí)視網(wǎng)膜組織中HIF-

4、1α呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),主要分布在視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和突破內(nèi)界膜的新生血管；13日齡時(shí)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)有所下降,此后表達(dá)強(qiáng)度漸向正常水平恢復(fù),與各同齡對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；酸中毒實(shí)驗(yàn)組8日齡時(shí)Ang-2表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng),10日齡鼠Ang-2表達(dá)明顯增強(qiáng)并達(dá)高峰,陽(yáng)性表達(dá)從神經(jīng)纖維層到內(nèi)網(wǎng)層,突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管,均有陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn),13日齡時(shí)Ang-2表達(dá)仍明顯,主要分布區(qū)域不變:在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中HIF-1α與Ang-2

5、的表達(dá)趨勢(shì)存在一致性。
　　 結(jié)論:代謝性酸中毒可能損害正在發(fā)育的視網(wǎng)膜血管而引起新生血管形成,進(jìn)一步證實(shí)了酸中毒是ROP的高危因素；HIF-1α、Ang-2在酸中毒誘導(dǎo)早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變模型中呈高表達(dá),兩者表達(dá)存在正相關(guān),且與視網(wǎng)膜新生血管形成趨勢(shì)一致,提示HIF-1α、Ang-2在視網(wǎng)膜的發(fā)育和ROP的發(fā)病過(guò)程中起著重要的作用；推測(cè)酸中毒可能通過(guò)直接或間接的途徑誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)升高,調(diào)控Ang-2表達(dá),從而促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血