苦丁冬青苦丁茶中咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)的分離純化及其抗肥胖機(jī)制研究.pdf

1、社會(huì)的發(fā)展和環(huán)境的變化，導(dǎo)致了人們的生活節(jié)奏、飲食習(xí)慣和膳食結(jié)構(gòu)都發(fā)生了巨大的改變，隨之而來的健康問題，越來越成為人類擔(dān)憂和研究的焦點(diǎn)。早在1948年，世界衛(wèi)生組織(WHO)已經(jīng)將肥胖定義為一種慢性代謝疾病，這種至今為止已經(jīng)威脅到超過5億人口的疾病，正在受到社會(huì)的關(guān)注。一方面，醫(yī)藥領(lǐng)域的科研工作者們正在努力尋找可以防治肥胖的復(fù)方藥物，另一方面，人們也沒有放棄利用一些天然食材保健養(yǎng)生，控制肥胖，改變不健康的狀態(tài)?？喽〔枳鳛榧兲烊坏拇貌栾?/p>

2、料已經(jīng)有兩千多年的歷史，其降脂減肥、清熱解暑、抗菌消炎等功效也慢慢被證實(shí)和認(rèn)可。本研究以冬青科苦丁茶中的苦丁茶冬青（Ilex kudingchaC.J.Tseng）為材料，從其多酚類物質(zhì)中分離提純了6種主要的活性成分——咖啡?？崴?CQA)類物質(zhì)，建立了分離純化及HPLC分析方法。探討了CQA類物質(zhì)對(duì)α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶及豬胰脂肪酶的抑制作用和對(duì)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖分化的影響，分別從糖代謝、脂代謝有關(guān)酶和細(xì)胞水平上討論了

3、CQA類物質(zhì)的抗肥胖特性。最后，初步研究了苦丁冬青苦丁茶多酚對(duì)腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用。
　　1、咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)的分離純化。通過柱層析和半制備色譜從苦丁冬青苦丁茶（Ilex kudingchaC.J.Tseng）分離純化得到6種咖啡?？崴?CQA)類物質(zhì)產(chǎn)品，并采用TSKgel ODS-80 TsQA色譜柱和二極管陣列檢測器(DAD)，建立一種便捷、靈敏的分析苦丁冬青苦丁茶中CQA類物質(zhì)的高效液相色譜分析方法。結(jié)果表明，通過半制

4、備色譜可分離得到純度95％以上的6種CQA類單體物質(zhì):3-CQA、4-CQA、5-CQA、3，4-diCQA、3，5-diCQA和4，5-diCQA。色譜條件:TSKgel ODS-80 TsQA色譜柱，流動(dòng)相為水-甲醇-5‰甲酸體系，梯度洗脫，流速0.5 mL/min，柱溫40℃，檢測波長326 nm。該方法在一定范圍內(nèi)有良好線性，相關(guān)系數(shù)為0.9992～0.9999，平均加標(biāo)回收率為96.34％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3％。
　　

5、2、CQA類物質(zhì)對(duì)酶活性的抑制作用。本文以苦丁冬青苦丁茶中的多酚類物質(zhì):6種咖啡?？崴釂误w為樣品，從酶抑制的角度探討苦丁茶降脂、抗肥胖的作用機(jī)理。建立以淀粉天青為底物的反應(yīng)體系，測定CQA樣品對(duì)α-淀粉酶活性的抑制效果，并分析其抑制類型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，6種CQA類物質(zhì)的酶抑制效果明顯，其中抑制活性最強(qiáng)的3，5-diCQA的IC50達(dá)到0.2842 mg/mL。以PNPG為反應(yīng)底物，建立測定CQA樣品對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究體系，

6、6種樣品對(duì)葡萄糖苷酶的抑制效果比較為:4，5-diCQA＞5-CQA＞3，4-diCQA＞3，5-diCQA＞4-CQA＞3-CQA，并且通過繪制Lineweave-Burk曲線，確定了6種CQA類物質(zhì)對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用均為非競爭性抑制。以對(duì)硝基苯基月桂酸酯(pNP laurate)為反應(yīng)底物，測定CQA樣品對(duì)豬胰脂肪酶抑制作用，6種樣品對(duì)葡萄糖苷酶的抑制效果比較為:3，5-diCQA＞4，5-diCQA＞3，4-diCQA＞3

7、-CQA＞4-CQA＞5-CQA，通過繪制Lineweave-Burk曲線，確定了6種CQA類物質(zhì)對(duì)豬胰脂肪酶的抑制作用均為非競爭性抑制。
　　3、CQA類物質(zhì)對(duì)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖、分化的影響效果。分別采用苦丁茶冬青苦丁茶中分離得到的6種CQA類物質(zhì)為樣品，研究這些單體對(duì)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞的影響。首先，通過MTT法，測定了6種樣品在24h、48h和72h對(duì)細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)確定了無細(xì)胞毒性的加樣濃度:50μg/m

8、L左右。使用胰島素、IBMX和DEX共同誘導(dǎo)細(xì)胞分化，并設(shè)定實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組。觀察結(jié)果證實(shí)，CQA類物質(zhì)對(duì)3T3-L1細(xì)胞的分化有明顯的抑制效果，并且這種抑制作用具有一定的劑量依賴性。
　　4、苦丁茶多酚對(duì)腸道微生態(tài)調(diào)節(jié)作用的初步研究。以苦丁冬青苦丁茶水提物、多酚提取物及3，5-diCQA單體為試驗(yàn)樣品，通過體外模擬人體腸道厭氧環(huán)境，對(duì)糞樣中微生物群進(jìn)行混合培養(yǎng)，并使用熒光原位雜交技術(shù)對(duì)茵群結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行研究比較。結(jié)果顯示，添加了