皮膚鱗狀細(xì)胞癌與基底細(xì)胞癌差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、背景與目的：
　　鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌均為常見的皮膚惡性腫瘤，它們都起源于表皮或皮膚附屬器，具有相近的好發(fā)部位和發(fā)病機(jī)制，并且兩種疾病在發(fā)病部位的局部也有相似的臨床表現(xiàn)。但在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的情況上，兩種疾病有著較大差異。
　　蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)是指將細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)組作為整體進(jìn)行研究，分析蛋白質(zhì)組中各蛋白的成分組成以及相互之間的的影響。蛋白質(zhì)組學(xué)主要是對蛋白質(zhì)組的蛋白質(zhì)構(gòu)成、差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究以及在生物活

2、動中各蛋白質(zhì)之間發(fā)揮的作用這三個方面進(jìn)行主要的研究。
　　這次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)技術(shù)對人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞和基底細(xì)胞癌細(xì)胞中所提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，找出其中存在差異的蛋白質(zhì)，并對部分差異蛋白進(jìn)行功能驗(yàn)證。這將對皮膚鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌的早期疾病診斷、早期發(fā)生及轉(zhuǎn)移等腫瘤標(biāo)志物的鑒定、腫瘤治療特異性位點(diǎn)的篩選，以及新的臨床治療方案的制定均會有重要的意義。
　　方法：
　　1.細(xì)胞的培養(yǎng)與樣品蛋白的提取本實(shí)驗(yàn)選擇人

3、皮膚鱗狀細(xì)胞癌A-431細(xì)胞系和人基底細(xì)胞癌TE-354.T做為腫瘤細(xì)胞模型進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。分別取對數(shù)生長期的兩種細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁生長至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面面積的90％時，進(jìn)行樣本蛋白提取。并應(yīng)用Bradford法對樣品蛋白濃度進(jìn)行測定。
　　2.樣品蛋白的雙向凝膠電泳通過IPG干膠條重水化、等電聚焦電泳、平衡IPG膠條、垂直向SDS-PAGE電泳、顏色等步驟分別對兩種樣品蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白分離，每個樣品分別制3塊雙向電泳膠板，并應(yīng)用圖像掃

4、描儀進(jìn)行掃描，獲得兩種蛋白樣品的雙向凝膠電泳圖譜。用圖像分析軟件對雙向凝膠電泳圖譜進(jìn)行分析，找出差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　1.兩種細(xì)胞系提取蛋白的雙向電泳蛋白圖譜大眼管基本一致，各個蛋白質(zhì)著色點(diǎn)基本都聚集在等電點(diǎn)(Ip)為pH4～7的范圍內(nèi);分子量(Ms)大多在15kDa～150kDa的范圍內(nèi)。
　　2.通過對在皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系和皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞系中提取樣品蛋白的雙向凝膠電泳膠板的分析，其中有16.8％的蛋

5、白質(zhì)點(diǎn)存在差異，其中13個蛋白在鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);和2個在鱗狀癌細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)。4個蛋白點(diǎn)在基底細(xì)胞癌組中未檢測出。
　　結(jié)論：
　　1.皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系和皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞系中提取樣品蛋白的雙向凝膠電泳圖譜中存在部分差異。皮膚鱗狀細(xì)胞癌所含蛋白質(zhì)組分較基底細(xì)胞癌的復(fù)雜。
　　2.分子量和等電點(diǎn)分別為(22.32，3.95)、(27.48，4.3)、(58.96，7.45)、(64.8，5)、(1