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文檔簡介
1、背景與目的:
鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌均為常見的皮膚惡性腫瘤,它們都起源于表皮或皮膚附屬器,具有相近的好發(fā)部位和發(fā)病機制,并且兩種疾病在發(fā)病部位的局部也有相似的臨床表現(xiàn)。但在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的情況上,兩種疾病有著較大差異。
蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)是指將細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)組作為整體進行研究,分析蛋白質(zhì)組中各蛋白的成分組成以及相互之間的的影響。蛋白質(zhì)組學(xué)主要是對蛋白質(zhì)組的蛋白質(zhì)構(gòu)成、差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究以及在生物活
2、動中各蛋白質(zhì)之間發(fā)揮的作用這三個方面進行主要的研究。
這次實驗應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)技術(shù)對人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞和基底細(xì)胞癌細(xì)胞中所提取的蛋白質(zhì)進行分析,找出其中存在差異的蛋白質(zhì),并對部分差異蛋白進行功能驗證。這將對皮膚鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌的早期疾病診斷、早期發(fā)生及轉(zhuǎn)移等腫瘤標(biāo)志物的鑒定、腫瘤治療特異性位點的篩選,以及新的臨床治療方案的制定均會有重要的意義。
方法:
1.細(xì)胞的培養(yǎng)與樣品蛋白的提取本實驗選擇人
3、皮膚鱗狀細(xì)胞癌A-431細(xì)胞系和人基底細(xì)胞癌TE-354.T做為腫瘤細(xì)胞模型進行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。分別取對數(shù)生長期的兩種細(xì)胞,待細(xì)胞貼壁生長至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面面積的90%時,進行樣本蛋白提取。并應(yīng)用Bradford法對樣品蛋白濃度進行測定。
2.樣品蛋白的雙向凝膠電泳通過IPG干膠條重水化、等電聚焦電泳、平衡IPG膠條、垂直向SDS-PAGE電泳、顏色等步驟分別對兩種樣品蛋白質(zhì)進行蛋白分離,每個樣品分別制3塊雙向電泳膠板,并應(yīng)用圖像掃
4、描儀進行掃描,獲得兩種蛋白樣品的雙向凝膠電泳圖譜。用圖像分析軟件對雙向凝膠電泳圖譜進行分析,找出差異蛋白質(zhì)點。
結(jié)果:
1.兩種細(xì)胞系提取蛋白的雙向電泳蛋白圖譜大眼管基本一致,各個蛋白質(zhì)著色點基本都聚集在等電點(Ip)為pH4~7的范圍內(nèi);分子量(Ms)大多在15kDa~150kDa的范圍內(nèi)。
2.通過對在皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系和皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞系中提取樣品蛋白的雙向凝膠電泳膠板的分析,其中有16.8%的蛋
5、白質(zhì)點存在差異,其中13個蛋白在鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中表達上調(diào);和2個在鱗狀癌細(xì)胞細(xì)胞表達下調(diào)的蛋白質(zhì)。4個蛋白點在基底細(xì)胞癌組中未檢測出。
結(jié)論:
1.皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系和皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞系中提取樣品蛋白的雙向凝膠電泳圖譜中存在部分差異。皮膚鱗狀細(xì)胞癌所含蛋白質(zhì)組分較基底細(xì)胞癌的復(fù)雜。
2.分子量和等電點分別為(22.32,3.95)、(27.48,4.3)、(58.96,7.45)、(64.8,5)、(1
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