切除腎上腺對大鼠EAE敏感性的影響及其機理的探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是由T淋巴細胞介導,以中樞神經系統(tǒng)(CNS)靜脈血管周圍單核細胞浸潤和白質脫髓鞘為特征的自身免疫性疾病。Lewis大鼠、DA大鼠和PL/J小鼠對EAE發(fā)病較為敏感,研究發(fā)現(xiàn)Lewis大鼠體內存在下丘腦-垂體-腎上腺軸功能(HPA)缺陷,血漿中皮質類固醇水平較低,是Lewis大鼠易感EAE的主要原因;但其價格昂貴、不易獲得或無來源等因素限制了該類動物在EAE的應用。目前常用Wistar大鼠來研究EAE模型

2、的制作,但其成模率低、敏感性差。本實驗通過切除Wistar大鼠腎上腺損傷HPA功能,使其體內皮質類固醇下降,對HPA功能損傷的Wistar大鼠在用豚鼠全脊髓勻漿(Guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)誘發(fā)的EAE癥狀、體征等進行評價,研究腎上腺切除導致下丘腦-垂體-腎上腺軸功能缺陷對Wistar大鼠誘發(fā)的EAE敏感性的影響,并探討了其機理。
   1.Lewis大鼠EAE模型的建立及鹽酸

3、奧芬米洛干預
   建立Lewis大鼠EAE模型,并觀察Lewis大鼠EAE的發(fā)病過程、神經癥狀評分、MBP特異性淋巴細胞和T淋巴細胞功能、皮質醇、MBP抗體、各細胞因子及皮層和下丘腦Bcl-2/Bax蛋白表達的變化,并用鹽酸奧芬米洛對Lewis大鼠EAE模型進行評價和驗證。研究發(fā)現(xiàn),Lewis大鼠經GPSCH-CFA免疫誘導后,第10d開始體重明顯下降,隨后均出現(xiàn)臨床癥狀,后肢無力、麻痹,伴有大小便失禁,嚴重者四肢麻痹或癱瘓,

4、平均神經癥狀評分最高為3.10分,發(fā)病率為100%;Lewis大鼠MBP特異性淋巴細胞刺激指數(shù)和ConA T淋巴細胞刺激指數(shù)均明顯升高(P<0.01);Lewis大鼠血清中皮質醇略微升高;血清中MBP抗體、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4和IFN-γ/IL-4比值顯著升高(P<0.01),大腦皮層和下丘腦Bcl-2蛋白表達均明顯減少(P<0.01),皮層和下丘腦Bax蛋白表達均明顯增強(P<0.01)。EAE大鼠灌胃給予1.0

5、mg·kg-1鹽酸奧芬米洛后,體重未降低,均未出現(xiàn)臨床癥狀,MBP特異性淋巴細胞刺激指數(shù)、ConA T淋巴細胞刺激指數(shù)和MBP抗體均明顯降低(P<0.01),血清中皮質醇顯著升高(P<0.05),血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2和IFN-γ/IL-4顯著降低(P<0.01)。
   2.切除腎上腺對大鼠誘發(fā)EAE敏感性的影響及其機理的研究
   通過切除Wistar大鼠腎上腺損傷HPA功能,建立HPA軸功能損傷的W

6、istar大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型,并觀察HPA軸功能損傷的Wistar大鼠EAE的發(fā)病過程、神經癥狀評分、MBP特異性淋巴細胞和T淋巴細胞功能、皮質醇、MBP抗體、各細胞因子及皮層和下丘腦Bcl-2/Bax蛋白表達的變化,并用鹽酸奧芬米洛對Wistar大鼠EAE模型進行評價和驗證。
   研究發(fā)現(xiàn),Lewis大鼠血清中正常皮質醇水平(213.2±27.4ng/ml)低于Wistar大鼠血清中正常皮質醇水平(360.5±

7、29.6ng/ml)。Wistar大鼠切除單側或雙側腎上腺后,血清中皮質醇水平顯著降低(P<0.05,P<0.01),雙側切除組大鼠血清中皮質醇水平明顯低于單側切除組(P<0.01),兩側腎上腺切除的大鼠血清皮質醇水平(183.3±69.7ng/ml)降低至Wistar大鼠正常皮質醇水平50%,而且略低于正常Lewis大鼠的皮質醇水平。
   GPSCH-CFA免疫誘導后,雙側切除腎上腺的Wistar大鼠在免疫后12-16 d出

8、現(xiàn)臨床癥狀和體重明顯下降,表現(xiàn)為尾部無力、拖垂、活動明顯減少,后肢無力、麻痹,伴有大小便失禁,嚴重者四肢麻痹,甚至癱瘓;雙側、單側切除腎上腺Wistar大鼠和假手術Wistar大鼠在平均神經癥狀評分最高分別為4.60、1.19和0.83分,發(fā)病率分別為100%、73.33%和58.33%;雙側切除組Wistar大鼠MBP特異性淋巴細胞刺激指數(shù)、Con A引起的T淋巴細胞刺激指數(shù)和MBP抗體均升高(P<0.05);單側切除組和雙側切除組大

9、鼠血清中IFN-γ、TNF-α和IL-2水平顯著升高(P<0.05,P<0.01),雙側切除組大鼠血清中Th2細胞因子IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值顯著升高(P<0.05);假手術組、單側切除組和雙側切除組大鼠皮層和下丘腦中Bcl-2蛋白表達均明顯降低(P<0.05,P<0.01),雙側切除組大鼠皮層和下丘腦中Bax蛋白表達均明顯降低(P<0.05,P<0.01)。給予1.0mg·kg-1鹽酸奧芬米洛后,單側治療組大鼠血清中皮質

10、醇水平明顯高于單側切除組和雙側切除組(P<0.01),雙側治療組大鼠血清中皮質醇水平明顯高于雙側切除組(P<0.01),且皮質醇水平恢復至正常水平;單側治療組和雙側治療組大鼠MBP特異性淋巴細胞刺激指數(shù)和ConAT淋巴細胞刺激指數(shù)明顯低于雙側切除組大鼠(P<0.05,P<0.01);單側治療組和雙側治療組大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4和IFN-γ/IL-4比值水平均明顯降低(P<0.05,P<0.01)。結論:本實

11、驗成功建立了Lewis大鼠EAE模型,并用鹽酸奧芬米洛進行了EAE模型的驗證;Lewis大鼠經GPSCH-CFA免疫誘導后,均出現(xiàn)神經癥狀,MBP特異性淋巴細胞和ConA誘導的T淋巴細胞功能明顯升高,Th1細胞分泌的細胞因子顯著升高,Th1/Th2失衡。實驗通過Wistar大鼠雙側腎上腺切除導致HPA功能缺陷,顯著增加Wistar大鼠誘發(fā)的EAE敏感性,建立了一種新型Wistar大鼠EAE模型;為EAE模型的制作提供了一種新方法。奧芬米

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