米非司酮對(duì)人宮頸癌細(xì)胞化療敏感性的影響及其機(jī)理的探討.pdf

1、目的:研究化療藥物聯(lián)合米非司酮(Mifepristone, MIF)在體外對(duì)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞和人宮頸鱗癌 SiHa細(xì)胞增殖影響,并探討其作用機(jī)制,以期發(fā)現(xiàn)一種通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)抑制宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的新的聯(lián)合用藥,為擴(kuò)大米非司酮化療增敏的用藥奠定科學(xué)的理論基礎(chǔ)。
　　方法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela、SiHa細(xì)胞,以單藥及聯(lián)合用藥處理后,MTT測(cè)定細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀(flow cytometry, FCM)分析藥物對(duì)人宮頸癌細(xì)

2、胞的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng),免疫印跡方法 Western blot檢測(cè)用藥處理前后細(xì)胞中P53、Survivin、HPV E6等蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:藥物在體外作用于細(xì)胞一定時(shí)間后, MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活力,發(fā)現(xiàn)不同濃度 DDP、5-Fu對(duì)人宮頸癌 Hela、SiHa細(xì)胞增殖均有抑制作用(P<0.01),具有量效和時(shí)效依耐性。MIF單藥結(jié)果顯示對(duì) SiHa細(xì)胞增殖有量效和時(shí)效依賴性的抑制作用;對(duì)HeLa細(xì)胞24h時(shí),溶媒組、低濃度 M

3、IF組(0.625、1.25、2.5、5、10μg/mL)與對(duì)照組比較,細(xì)胞增殖抑制率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DDP、5-Fu分別聯(lián)合 MIF可增強(qiáng)它們對(duì) HeLa、SiHa細(xì)胞的增殖抑制率(P<0.01);聯(lián)合用藥作用24小時(shí)后流式細(xì)胞儀分析可見(jiàn)與單用藥相比,前者顯著提高了細(xì)胞的凋亡率(P<0.01),且隨著藥物濃度的增大,凋亡細(xì)胞的比例增加。蛋白表達(dá)顯示,單用及聯(lián)合應(yīng)用均能使細(xì)胞中p53蛋白表達(dá)上調(diào),呈濃度依賴性,且以聯(lián)合

4、應(yīng)用更為顯著; Survivin蛋白在不同聯(lián)合方案中表達(dá)不同,兩種細(xì)胞中DDP聯(lián)合 MIF組與 DDP單藥比較 Survivin蛋白表達(dá)上調(diào),而HeLa細(xì)胞中5-Fu聯(lián)合 MIF組 Survivin蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯差異;HeLa細(xì)胞中HPV-E6蛋白隨著聯(lián)合用藥劑量的增加表達(dá)下調(diào);5-Fu聯(lián)合 MIF作用于 SiHa細(xì)胞后,細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)逐漸增加,Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸降低。
　　結(jié)論:(1)在體外,MIF具有抑制人宮頸鱗癌

5、 SiHa細(xì)胞增殖的作用,一定條件下(大于10μg/mL或延長(zhǎng)作用時(shí)間)還可以抑制人宮頸腺癌(Hela)細(xì)胞增殖作用;(2) MIF能增強(qiáng) DDP、5-Fu對(duì)宮頸癌 Hela、SiHa細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用;(3) MIF對(duì) Hela細(xì)胞增殖抑制和化療增敏作用可能與上調(diào) P53蛋白,下調(diào) HPV16-E6蛋白有關(guān), MIF增敏 DDP可能還與上調(diào) Survivin蛋白表達(dá)有關(guān);(4)MIF對(duì) SiHa細(xì)胞增殖抑制和化療增敏作用可能