抵抗素在糖尿病和冠心病中的作用及其可能的分子機(jī)制.pdf

1、抵抗素是一種新近發(fā)現(xiàn)的富含半胱氨酸的脂肪內(nèi)分泌因子，在嚙齒類動(dòng)物，抵抗素可以引起胰島素抵抗，與肥胖和糖尿病等有明顯的相關(guān)性，但人類抵抗素在這些疾病中的作用尚不明確。本研究旨在觀察糖尿病，糖尿病合并冠心病及冠心病不同類型之間的血清抵抗素水平，明確其在此類疾病中的作用。并在此基礎(chǔ)上，對(duì)抵抗素在細(xì)胞內(nèi)可能的作用靶點(diǎn)進(jìn)行初步探討。 材料和方法: 1.研究對(duì)象 在2型糖尿病(T2DM)、T2DM合并冠心病(CAD)與抵抗素

2、的關(guān)系研究中，取T2DM患者40例、T2DM合并CAD患者38例、健康對(duì)照組34例。而在觀察不同類型冠心病患者血清抵抗素水平的變化時(shí)，26例健康人群和65例冠心病患者入選，其中急性心肌梗死(AMD 24例、不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)19例、穩(wěn)定性心絞痛(SAP)22例。 2.材料和方法酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清抵抗素水平，白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)；超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)；心肌肌酸激酶(CK)；心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)；肌鈣蛋

3、白(cTnI)等用常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定。 構(gòu)建真核表達(dá)載體pSecTag2B-RETN，pSeclRP-LUC，pSec-LUC，pSecO-LUC質(zhì)粒。pSecTag2B-RETN質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染L02細(xì)胞，用Western blowing檢測(cè)抵抗素融合蛋白的表達(dá)。免疫熒光明確抵抗素在細(xì)胞中的定位。把含熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒pSecIRP-LUC，pSec-LUC，pSecO-LUC瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，重組人抵抗素處理后，測(cè)定熒光

4、素酶的活性。觀察抵抗素對(duì)胰島素受體表達(dá)的調(diào)控作用。 結(jié)果: 1.抵抗素與T2DM、T2DM合并CADT2DM和T2DM合并CAD組血清抵抗素水平均明顯高于對(duì)照組；T2DM合并CAD組血清抵抗素比T2DM組高。 2.抵抗素與AMI、UAP和SAPAMI、UAP和SAP各組血清抵抗素水平與對(duì)照組相比均明顯增高(P<0.05)。另外，AMI組中血清抵抗素水平高于UAP和SAP組。同時(shí)發(fā)現(xiàn)UAP和SAP組之間存在著明顯的

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在AMI組，血清抵抗素水平與WBC、hsCRP和CKmax、CK-MBmax、cTnImax正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為0.412、0.427、0.731、0.678、0.656)。 3.抵抗素在細(xì)胞中的定位和對(duì)胰島素受體表達(dá)的調(diào)控經(jīng)Western blot證實(shí)，抵抗素融合蛋白表達(dá)成功。免疫熒光激光共聚焦顯微鏡觀察，綠色熒光集中在細(xì)胞核，提示抵抗素的作用靶點(diǎn)可能在細(xì)胞核。含胰島素受體啟動(dòng)子的報(bào)告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，

6、重組抵抗素蛋白處理后熒光素酶活性與處理前相比無(wú)顯著性差異。 結(jié)論: 1.T2DM、T2DM合并CAD患者血清抵抗素明顯增高，推測(cè)抵抗素可能參與了胰島素抵抗及動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。 2.血清抵抗素水平與心肌損害大小及炎癥標(biāo)志物有關(guān)，隨著病情的進(jìn)展、心肌損害的加重，血清抵抗素水平呈增高趨勢(shì)，提示血清抵抗素可能作為炎癥因子參與了動(dòng)脈粥樣硬化和急性心肌梗死的發(fā)生、發(fā)展。 3.抵抗素在細(xì)胞水平的定位研究，發(fā)現(xiàn)抵抗素蛋