缺氧誘導(dǎo)因子-1α與缺氧復(fù)氧條件下NLRP3炎癥小體激活的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　研究缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypo xia ind uc ib le factor-1α,HIF-1α）與缺氧復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）條件下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NLRP3炎癥小體激活的關(guān)系。
　　方法：
　?。?）建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型；
　?。?）采用Western Blot分別檢測(cè)缺氧和復(fù)氧不同時(shí)間后 HIF-1α與NLRP3的表達(dá)情況，選出蛋白表達(dá)最高的缺

2、氧和復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)；
　　（3）在選取的缺氧復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)分兩部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第一部分：①正常組；② H/R組；③ H/R+HIF-1α抑制劑YC-1組；④H/R+HIF-1α激動(dòng)劑DMOG組；第二部分：①正常組；②H/R組；③H/R+s iRN A陰性對(duì)照組；④H/R+HIF-1αs iRN A組；⑤H/R+H IF-1α空載質(zhì)粒組；⑥H/R+HIF-1α過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組；
　　（4）采用Western Blot和熒光定量PCR檢測(cè)各組

3、HIF-1α、NLRP3、ASC、caspase-1的蛋白和mRNA表達(dá)情況。ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞因子IL-18的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　（1）在缺氧復(fù)氧條件下，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HIF-1α、NLRP3蛋白表達(dá)較正常組明顯升高，在缺氧16h和復(fù)氧8h兩者表達(dá)最為顯著。
　?。?）加入YC-1預(yù)處理的缺氧復(fù)氧組，HIF-1α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表達(dá)較單純?nèi)毖鯊?fù)氧組明顯降低（P<0.05），HI

4、F-1α mRNA水平無(wú)變化（P>0.05），NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表達(dá)較缺氧復(fù)氧組明顯降低（P<0.05），IL-18分泌量較缺氧復(fù)氧組明顯減少（P<0.05）；加入DMOG預(yù)處理的缺氧復(fù)氧組，HIF-1α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA表達(dá)較缺氧復(fù)氧組均明顯升高（P<0.05），且IL-18分泌量較單純?nèi)毖鯊?fù)氧組明顯增多（P<0.05）。
　　（3）沉默HIF-1α后進(jìn)行缺氧復(fù)氧

5、處理，HIF-1α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA表達(dá)較缺氧復(fù)氧組均明顯降低（P<0.05），IL-18分泌量較缺氧復(fù)氧組明顯減少（P<0.05）；過(guò)表達(dá)HIF-1α后進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理，HIF-1α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA表達(dá)較缺氧復(fù)氧組均明顯升高（P<0.05），IL-18分泌量較缺氧復(fù)氧組明顯增多（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）缺氧復(fù)氧條件下，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞