NLRP3炎癥小體激活及其在真菌性角膜炎固有免疫中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：探討NLRP3（Nod-like receptor protein-3，NLRP3）炎癥復(fù)合體在煙曲霉菌感染的人角膜上皮細(xì)胞中的作用，及其激活方式。
　　方法：將研究對(duì)象設(shè)為體外培養(yǎng)的人永生化角膜細(xì)胞（HCECs）。本實(shí)驗(yàn)分為2部分。（1）以未加任何刺激的HCECs為空白對(duì)照組，以煙曲霉菌菌絲刺激的HCECs為實(shí)驗(yàn)組，在4、6、8、12、16h、24h用Real-time PCR法檢測(cè)NLRP3、ASC、caspase-1

2、mRNA，在8,16、24、36h時(shí)間點(diǎn)用Western Blot法檢測(cè)NLRP3蛋白表達(dá)；（2）以體外培養(yǎng)的未加真菌刺激的HCECs為空白對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞先加入不同濃度的格列本脲（Glyburide）預(yù)刺激兩小時(shí)，然后加入煙曲霉菌菌絲刺激，在12小時(shí)時(shí)間點(diǎn)用real-time PCR法檢測(cè)NLRP3 mRNA，在24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)用Western Blot法檢測(cè)NLRP3蛋白表達(dá)，在24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)用ELISA法檢測(cè)IL-1β蛋白表達(dá)。<

3、br>　　結(jié)果：（1）煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起NLRP3、ASC、caspase-1基因水平表達(dá)量相對(duì)增高，時(shí)間依賴性，12h達(dá)到峰值；煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起NLRP3蛋白水平表達(dá)量相對(duì)增高，呈時(shí)間依賴性，24h達(dá)到峰值；(2)在不同濃度的格列本脲抑制炎癥小體的情況下，NLRP3基因表達(dá)量降低，并呈劑量依賴性，400mM為最佳刺激濃度；并且400mM格列本脲可使NLRP3和IL-1β蛋白表達(dá)量降低。其表達(dá)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義