NLRP3炎癥小體激活及其在真菌性角膜炎固有免疫中的作用機制.pdf

1、目的：探討NLRP3（Nod-like receptor protein-3，NLRP3）炎癥復合體在煙曲霉菌感染的人角膜上皮細胞中的作用，及其激活方式。
　　方法：將研究對象設為體外培養(yǎng)的人永生化角膜細胞（HCECs）。本實驗分為2部分。（1）以未加任何刺激的HCECs為空白對照組，以煙曲霉菌菌絲刺激的HCECs為實驗組，在4、6、8、12、16h、24h用Real-time PCR法檢測NLRP3、ASC、caspase-1

2、mRNA，在8,16、24、36h時間點用Western Blot法檢測NLRP3蛋白表達；（2）以體外培養(yǎng)的未加真菌刺激的HCECs為空白對照組，實驗組細胞先加入不同濃度的格列本脲（Glyburide）預刺激兩小時，然后加入煙曲霉菌菌絲刺激，在12小時時間點用real-time PCR法檢測NLRP3 mRNA，在24小時時間點用Western Blot法檢測NLRP3蛋白表達，在24小時時間點用ELISA法檢測IL-1β蛋白表達。<

3、br>　　結果：（1）煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起NLRP3、ASC、caspase-1基因水平表達量相對增高，時間依賴性，12h達到峰值；煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起NLRP3蛋白水平表達量相對增高，呈時間依賴性，24h達到峰值；(2)在不同濃度的格列本脲抑制炎癥小體的情況下，NLRP3基因表達量降低，并呈劑量依賴性，400mM為最佳刺激濃度；并且400mM格列本脲可使NLRP3和IL-1β蛋白表達量降低。其表達變化差異均有統(tǒng)計學意義