槲皮素對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞增殖及自噬的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.探討QUE對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響，以及藥物濃度和作用時(shí)間對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制的關(guān)系。
　　 2.探討QUE對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞自噬標(biāo)記物L(fēng)C3表達(dá)的影響，以及自噬在對(duì)BIU-87細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　 3.探討QUE對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞自噬基因Beclin1的影響，以及藥物濃度及作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞自噬表達(dá)的影響，初步探討自噬對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。
　　 4.期望為臨床治

2、療膀胱癌提供新的途徑，以及通過(guò)自噬途徑對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響提供治療的理論依據(jù)，并可能為臨床上膀胱癌等腫瘤的綜合治療提供新的中西藥思路。
　　 [方法]
　　 1.人膀胱癌BIU-87細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)將凍存的BIU-87細(xì)胞取出，迅速放入37℃的恒溫水浴中，輕輕緩慢振蕩1分鐘，再將其移入培養(yǎng)瓶中，加入含20％胎牛血清的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)并傳代。
　　 2.MTT(四氮唑藍(lán))檢測(cè)法測(cè)定Que對(duì)BIU-87細(xì)胞增殖的抑

3、制率MTT檢測(cè)法測(cè)定對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的BIU-87細(xì)胞，用酶標(biāo)檢測(cè)儀以570nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色，測(cè)吸光度值(A)，計(jì)算細(xì)胞抑制率。
　　 3.自噬標(biāo)記物L(fēng)C3免疫熒光的檢測(cè)運(yùn)用間接免疫熒光法檢測(cè)LC3的表達(dá)，一抗和二抗分別與對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞作用，充分反應(yīng)后避光在熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞染色情況，拍攝LC3的綠色免疫熒光。再用胰酶消化離心后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的LC3染色表達(dá)率。
　　 4.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)Beclin

4、1-mRNA將QUE不同濃度和時(shí)間作用后的BIU-87細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定Beclin1基因的相對(duì)表達(dá)量，來(lái)推測(cè)Beclin1對(duì)細(xì)胞自噬的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.實(shí)驗(yàn)組的吸光度(A)值明顯低于對(duì)照組，不同實(shí)驗(yàn)組的吸光度值隨著QUE濃度和時(shí)間的增加而降低(p<0.05)。
　　 2.與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組LC3綠色熒光表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，不同濃度實(shí)驗(yàn)組的LC3綠色熒光強(qiáng)度有明顯差別(p<

5、0.05)；FCM測(cè)定的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)量減少、染色率明顯高于對(duì)照組(p<0.05)。
　　 3.與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組Beclin1-mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增高(p<0.05)，抽提的RNA產(chǎn)物完整，目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增和熔解曲線特異性好。
　　 [結(jié)論]
　　 1.QUE對(duì)BIU-87細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，且此作用與QUE的作用時(shí)間和劑量有明顯的相關(guān)性，即隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加，對(duì)腫瘤細(xì)胞抑