缺氧微環(huán)境對粘附分子調(diào)控增強(qiáng)胰腺癌侵襲力的研究.pdf

1、【目的】通過檢測缺氧誘導(dǎo)因子－1α（Hypoxia Induced Factor，HIF－1α）和粘附分子E-cadherin、integrinα5和integrinβ1在胰腺癌組織及人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC－1中的表達(dá)，以及細(xì)胞侵襲力的變化，探討HIF－1α對胰腺癌粘附分子調(diào)控作用及侵襲轉(zhuǎn)移的影響。 【方法】應(yīng)用免疫組化（EnVision System）檢測了34例胰腺癌和10例正常胰腺組織中HIF－1α、E-cadherin、

2、integrinα5和integrinβ1的表達(dá)情況，分析這些指標(biāo)的相互關(guān)系及與臨床病理特點的關(guān)系。進(jìn)一步對人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC－1在不同缺氧培養(yǎng)時間下,采用RT-PCR 和Western blot術(shù)檢測HIF-1α、E-cadherin、integrinα5和integrinβ1的mRNA和蛋白表達(dá)變化；并用Matrigel膠檢測人胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。應(yīng)用YC-1阻斷HIF-1α后對上述各指標(biāo)的作用。分析缺氧時各指標(biāo)的表達(dá)

3、規(guī)律及與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 【結(jié)果】 1、HIF-1α和粘附分子在胰腺癌組織中的表達(dá)及意義在胰腺癌組織中HIF-1α、E-cadherin、integrinα5和integrinβ1蛋白表達(dá)陽性率分別為76.47％、38.21％、47.06％、91.18％。HIF-1α和integrinβ1的表達(dá)明顯高于正常胰腺組織（p <0.01和0.05），而E-cadherin和integrinα5的表達(dá)明顯低于正常胰腺組織

4、（p <0.01）。在胰腺癌組織中HIF-1α表達(dá)與E-cadherin、integrinα5的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.482，p <0.05；r＝-0.434，p <0.05）；與integrinβ1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.366，p <0.05）。在胰腺癌組織中HIF-1α表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（p <0.05）；E-cadherin、integrinα5和integrinβ1與腫瘤臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)（

5、p<0.05），與腫瘤大小無關(guān)；上述各指標(biāo)與患者年齡，性別及病理分級無關(guān)。 2、缺氧微環(huán)境對人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC－1細(xì)胞HIF-1α及粘附分子表達(dá)和侵襲力的影響不同缺氧時間和HIF-1α抑制劑YC－1對PANC－1細(xì)胞的HIF-1α和integrinβ1的mRNA 表達(dá)無明顯變化；E-cadherin和integrinα5的mRNA的表達(dá)均隨缺氧時間的延長而下降(P <0.05),而應(yīng)用YC-1后E-cadherin和inte

6、grinα5表達(dá)增強(qiáng)(P <0.05)。隨著缺氧時間的延長, HIF-1α蛋白表達(dá)逐漸上升,缺氧24 h 達(dá)到高峰(P <0.05),加用YC-1缺氧培養(yǎng)后，PANC－1細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)與常氧培養(yǎng)相似；E-cadherin和integrinα5的蛋白表達(dá)均隨缺氧時間的延長而下降(P <0.05),加用YC-1缺氧培養(yǎng)后，兩者的蛋白表達(dá)明顯高于缺氧培養(yǎng)(P <0.05)，與常氧培養(yǎng)相似。HIF-1α與E-cadherin、inte

7、grinα5的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.954 P <0.05；r＝－0.951，P <0.05）；integrinβ1的蛋白于各缺氧時間段及應(yīng)用YC－1后均高表達(dá)，與對照組相似。細(xì)胞侵襲力檢測顯示：隨著缺氧時間延長,細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)(P <0.05),而YC-1可抑制缺氧所致的細(xì)胞侵襲力增強(qiáng)(P <0.05)。 【結(jié)論】 1、胰腺癌組織中HIF-1α和Integrinβ1呈高表達(dá)；E-cadherin和Integri

8、nα5呈低表達(dá)。并且HIF-1α的表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；E-cadherin、Integrinα5和Integrinβ1與腫瘤臨床分期和淋巴結(jié)有關(guān)。提示HIF-1α、E-cadherin、Integrinα5和Integrinβ1在胰腺癌發(fā)展過程中起重要作用。 2、缺氧微環(huán)境可誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞株HIF-1α的蛋白高表達(dá)，而下調(diào)E-cadherin和Integrinα5的表達(dá)。加用YC-1抑制HIF-1α表