HIF-1α介導EMT在缺氧誘導胰腺癌侵襲轉移中的機制研究.pdf

1、目的：
　　 本課題通過檢測胰腺導管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)組織中缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)和上皮細胞間質轉型(epithelial to mesenchvmal transition，EMT)相關蛋白的表達，探討這些蛋白與PDAC患者臨床病理及預后的關系；體內外實驗研究缺氧微環(huán)境下HIF-1α對胰腺癌細胞侵

2、襲遷移和轉移的影響，并探索缺氧微環(huán)境誘導EMT的分子機制。
　　 方法：
　　 (1)采用免疫組化檢測92例PDAC癌組織和10例正常胰腺組織中HIF-1α、Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin、整合素α3和α6的表達。
　　 (2)選用三株不同轉移潛能的人胰腺癌細胞株AsPC-1、Capan-2和Panc-1，常氧、缺氧、缺氧狀態(tài)下阻斷HIF-1α的表達，應用形態(tài)學觀察，Transw

3、ell侵襲遷移實驗檢測其體外侵襲遷移能力，qRT-PCR及Western-blot檢測HIF-1α及EMT相關基因的表達。
　　 (3)采用生物信息學分析Snail啟動子區(qū)域HIF-1α潛在的結合位點，熒光素酶報告基因分析、EMSA和ChIP檢測Snail啟動子區(qū)域是否存在HIF-1α特異性結合的HRE。
　　 (4)動物實驗驗證沉默HIF-1α基因表達對體內移植瘤的生長情況和淋巴結轉移的影響。
　　 結果：

4、r>　　 (1)HIF-1α、Snail、Slug、N-cadherin、整合素α3/α6在PDAC組織中高表達而E-cadherin低表達；HIF-1α的表達與淋巴結轉移有關，Snail的表達與TNM分期有關，Slug的表達與TNM分期和淋巴結轉移有關，N-cadherin的表達與TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤分化程度有關，整合素α3的表達與淋巴結轉移有關，整合素α6的表達與TNM分期和淋巴結轉移有關；HIF-1α的表達與Snail、

5、Slug的表達呈正相關，與E-cadherin的表達呈負相關，Snail的表達與E-cadherin的表達呈負相關，E-cadherin的表達與N-cadherin的表達呈負相關；HIF-1α、Snail和E-cadherin是PDAC患者術后獨立的預后因素。
　　 (2)缺氧誘導胰腺癌細胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1發(fā)生典型的EMT樣形態(tài)學改變和體外侵襲遷移能力增強，上調HIF-1α、Snail、N-cadhe

6、rinmRNA和蛋白的表達，下調E-cadherin mRNA和蛋白的表達；抑制HIF-1α的表達后，缺氧所誘導的胰腺癌細胞EMT樣分子標記改變和體外侵襲遷移能力增強被逆轉。
　　 (3)生物信息學分析發(fā)現Snail啟動子區(qū)域存在2個可能的HRE序列，分別位于(-653，-649)和(-543，-538)，熒光素酶報告基因分析證實Snail啟動子區(qū)(-543，-538)位點是HIF-1α特異性結合位點，EMSA和ChIP進一步確

7、證Snail啟動子區(qū)存在HRE，位于(-543，-538)。
　　 (4)沉默Panc-1細胞株HIF-1α基因的表達，裸鼠爪墊移植瘤淋巴結轉移發(fā)生率明顯低于Panc-1親本細胞和Panc-1-NC細胞，但不影響其體內增殖能力。
　　 結論：
　　 (1)HIF-1α、Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin、整合素α3/α6在PDAC中存在異常表達，并與PDAC的生物學行為有關，特別是轉

8、移；HIF-1α、Snail和E-cadherin是PDAC患者術后獨立的預后因素。
　　 (2)缺氧增加胰腺癌細胞HIF-1α和Snail的表達，促進鈣粘素轉換；阻斷HIF-1α的表達，Snail的表達下調，逆轉鈣粘素轉換。提示缺氧誘導EMT，增強胰腺癌細胞體外侵襲和遷移能力可能是通過HIF-1α調控Snail的表達實現。
　　 (3)首次鑒定Snail啟動子區(qū)域存在HIF-1α的結合位點，HIF-1α與之結合后直接調