轉(zhuǎn)番茄鐵載體蛋白基因（LeIRT2）八棱海棠的鑒定.pdf

1、　　本文通過(guò)PCR、PCR-Southern、Southern和RT-PCR等分子檢測(cè)技術(shù)手段對(duì)轉(zhuǎn)番茄鐵載體蛋白基因(LeIRT2)蘋果砧木八棱海棠和模式植物革新一號(hào)煙草株系進(jìn)行了分子鑒定。并通過(guò)水培的方法對(duì)經(jīng)過(guò)分子鑒定的轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了生理生化分析和有關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。同時(shí)通過(guò)微嫁接的方法，對(duì)轉(zhuǎn)基因蘋果砧木八棱海棠株系與當(dāng)前生產(chǎn)上主栽蘋果品種進(jìn)行了嫁接親和性的早期鑒定。主要結(jié)果如下：　　1.通過(guò)PCR和PCR-Southern方法，對(duì)獲

2、得的GUS陽(yáng)性的19個(gè)卡那霉素抗性的八棱海棠株系進(jìn)行了分子鑒定，結(jié)果表明有11個(gè)株系表現(xiàn)為陽(yáng)性?！　?.在低鐵(鐵濃度為10-6mol/L)水培條件下，2個(gè)轉(zhuǎn)番茄鐵載體蛋白基因八棱海棠株系表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗缺鐵脅迫能力。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因植株根系的吸收區(qū)和根毛的表面結(jié)構(gòu)的皺折增多，表面積增大?！　?.通過(guò)在低鐵(鐵濃度為10-6mol/L)水培條件下，對(duì)轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因八棱海棠植株的根系和葉片的Fe、Mn、Zn等金屬元素含量進(jìn)行分析，結(jié)果

3、表明轉(zhuǎn)基因株系在缺鐵情況下顯著提高了根系總鐵的含量和葉片中活性鐵的含量，同時(shí)也大幅度提高了其根系和葉片中鋅的含量，而對(duì)Mn的吸收沒(méi)有明顯的影響?！　?.取低鐵水培條件下，培養(yǎng)5天后的轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因八棱海棠植株的根系和葉片，采用組織印跡的方法對(duì)目的基因在根系和葉片中的表達(dá)部位進(jìn)行了分析，印跡雜交結(jié)果顯示，目的基因在轉(zhuǎn)基因植株葉片主脈的韌皮部和根系木質(zhì)部中表達(dá)的量較大。　　5.采用微嫁接法對(duì)轉(zhuǎn)基因株系和蘋果3個(gè)主栽品種的嫁接親和性進(jìn)行

4、了鑒定，結(jié)果表明，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法對(duì)嫁接成活率和生根率有較大影響，生根愈傷同步的方法可以同時(shí)獲得較高的嫁接成活率和生根率。　　6.對(duì)9個(gè)GUS陽(yáng)性、卡那霉素抗性的革新一號(hào)煙草轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了分子鑒定，結(jié)果顯示，有6個(gè)轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)為陽(yáng)性；水培試驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因株系1、3不但提高了植株的鐵吸收能力，而且還促進(jìn)了植株的生長(zhǎng)，但轉(zhuǎn)基因株系2卻與對(duì)照無(wú)明顯區(qū)別。　　7.最后研究開(kāi)發(fā)了一種適用于蘋果屬組培苗總RNA快速、高效地提取的新方法