山西呂梁市幽門(mén)螺桿菌cagPAI分布及HSP60表達(dá)的研究.pdf

1、背景與目的:目前認(rèn)為H.pylori感染者臨床表現(xiàn)的差異除與宿主的易感染性及環(huán)境因素、生活方式等有關(guān)外，更重要的是與H.pylori菌株的毒力差異有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，CagA與H.pylori的致病密切相關(guān)。而在最近的報(bào)道中，發(fā)現(xiàn)CagA表達(dá)陽(yáng)性的H.pylori菌株中含有一個(gè)約40kb特殊基因的DNA片斷，該片斷只出現(xiàn)于致病相關(guān)菌株，基因呈高密度分布，具有細(xì)菌致病島的典型特征，因此稱(chēng)其為H.pylori的Cag致病島(cagPAI)，視

2、為H.pylori感染的又一個(gè)新的致病因素?，F(xiàn)已清楚H.pylori中完整的CagPAI的結(jié)構(gòu)，即其中各個(gè)基因的分布情況，但是否在致病的H.pylori中一定存在完整的CagPAI，CagPAI在相關(guān)性H.pylori胃部疾病中的作用等尚未完全清楚。為探討山西呂梁市H.pylori的感染及臨床分離率，本地區(qū)CagPAI中cagA、cagM、cagT、ORF13、ORF10各基因的存在情況以及在H.pylori相關(guān)胃部疾病中的作用，以更多

3、地了解CagPAI在H.pylori致病機(jī)制中的作用，我們提出了這一課題。 熱休克蛋白(Heat Shcok Proteins，HSPs)是一類(lèi)進(jìn)化上高度保守，廣泛存在于原核與真核細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞正常生命活動(dòng)中起重要作用，應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)增多的一類(lèi)蛋白。目前，有很多資料表明H.pylori感染與HSP70的表達(dá)有關(guān)，并在H.pylori致病中起重要作用。近來(lái)，有人發(fā)現(xiàn)，隨著H.pylori感染程度的加重，HSP60的表達(dá)也明顯升高。

4、為進(jìn)一步探討H.pylori感染與HSP60表達(dá)的相關(guān)性，我們?cè)O(shè)計(jì)了對(duì)HSP60表達(dá)的研究，旨在為臨床判定H.pylori感染程度及療效提供一定的依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法:胃鏡直視下，用滅菌活檢鉗取306例有上消化道癥狀，就診前兩周內(nèi)未服用抗生素、粘膜保護(hù)劑及質(zhì)子泵抑制劑等藥物的患者的胃粘膜病變組織兩塊。各型胃部疾病的病理診斷結(jié)果由山西汾陽(yáng)醫(yī)院病理科提供。用細(xì)菌的分離培養(yǎng)、革蘭染色形態(tài)檢查、快速尿素酶試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)及氧化酶試驗(yàn)確定

5、H.pylori感染。用PCR對(duì)cagA、cagM、cagT、ORF13及ORF10基因進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)cagA進(jìn)行序列測(cè)定。標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋、切片，用免疫組化技術(shù)對(duì)HSP60的表達(dá)進(jìn)行定性及半定量測(cè)定。 結(jié)果:①本試驗(yàn)共分離培養(yǎng)得到H.pylori臨床菌株148株，其中來(lái)自慢性胃炎38株，消化性潰瘍36株，萎縮性胃炎48株，胃癌26株。148株H.pyloril臨床分離株中cagA陽(yáng)性菌株140株，陽(yáng)性率為94.59％；②cagA

6、基因的測(cè)序結(jié)果與NCBI上登錄的cagA標(biāo)準(zhǔn)菌株(NCTC11637)基因?qū)Ρ劝l(fā)現(xiàn)，本地區(qū)菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株的核苷酸同源性為35.26％，而本地區(qū)菌株間核苷酸的同源性為95.35％；③來(lái)自慢性胃炎的38株H.pylori中，cagA陽(yáng)性率為92.10％，cagM：92.10％，cagT：97.29％，ORF13：92.10％，ORF10：89.47％。來(lái)自消化性潰瘍的36株H.pylori中，cagA陽(yáng)性率為94.44％，cagM：100.

7、0％，cagT：97.22％，ORF13：94.44％ORF10：91.66％。來(lái)自萎縮性胃炎的48株H.pylori中，cagA陽(yáng)性率為95.83％，cagM：97.91％，cagT：91.66％，ORF13：95.83％，ORF10：93.75％。來(lái)自胃癌的26株H.pylori中，cagA陽(yáng)性率為96.15％，cagM：100.00％，cagT：92.00％，ORF13：100.0％，ORF10：96.00％。H.pylori感染

8、的胃部疾病中，各基因的存在無(wú)顯著性差異(P>0.05)；④H.pylori感染的胃部疾病中，72.97％(108/148)的菌株可能有完整的CagPAI；27.0％(40/148)菌株部分缺失CagPAI。CagPAI完整性在各胃及十二指腸疾病中的分布無(wú)顯著性差異(P>0.05)。部分缺失CagPAI在各胃及十二指腸疾病中的分布無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 H.pylori陽(yáng)性及陰性菌株中HSP60表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果：HSP60的表達(dá)主要

9、見(jiàn)于胃黏膜固有層的炎性細(xì)胞的細(xì)胞漿中；H.pylori陽(yáng)性菌株HSP60表達(dá)(54.72％)顯著高于H.pylori陰性菌株(26.31％)(P<0.005)：HSP60在淺表性胃炎、消化性潰瘍、萎縮性胃炎及胃癌中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為31.57％、41.66％、70.83％、76.92％，隨著臨床疾病的嚴(yán)重程度有增高趨勢(shì)，比較有顯著性差異(P<0.005)：各種臨床疾病的過(guò)表達(dá)率分別為15.78％、22.22％、47.91％及65.38％

10、；萎縮性胃炎及胃癌中HSP60的過(guò)表達(dá)與淺表性胃炎及消化性潰瘍中HSP60的過(guò)表達(dá)有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論:①本地區(qū)臨床胃疾患病人中H.pylori的檢出率為48.36％；②cagA的陽(yáng)性率為94.59％。cagA基因與標(biāo)準(zhǔn)菌株cagA序列相比對(duì)有一定的差異，cagA基因的序列特性有待進(jìn)一步研究；③cagA、cagM、cagT、ORF13、ORF10五個(gè)基因在各個(gè)類(lèi)型的胃部疾病中的檢出率都比較高，提示cagPAI的存