運輸應(yīng)激仔豬組織的應(yīng)激性損傷及Hsp47、Hsp60表達.pdf

1、本試驗選擇純種皮特蘭(12)頭和二花臉(24頭)兩個品種仔豬，置于相同的飼養(yǎng)管理條件下飼養(yǎng).待仔豬體重達到20±1 kg時，隨機選取6頭皮特蘭和12頭二花臉仔豬作為運輸組，在常規(guī)路段上進行2h運輸應(yīng)激(車速為60千米/小時)，同時將其余兩個品種的仔豬飼養(yǎng)于正常飼養(yǎng)環(huán)境中作為對照組.2h運輸應(yīng)激結(jié)束后，將所有運輸和對照組受試仔豬均先行注射戊巴比妥鈉(10 mg/kg)麻醉后再進行剖殺.采取血液，分離血清，于-20℃保存用于肌酸激酶(cre

2、atine kinase，CK)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)的檢測；采取心臟、肝臟、腎臟和胃等組織，一部分固定于4％的多聚甲醛溶液中以備組織病理學(xué)，Hsp47和Hsp60的免疫組織化學(xué)定位檢測，另一部分迅速置于液氮中速凍，并保存于-70℃冰箱，用于Hsp47和Hsp60的定量檢測。 比色法檢測結(jié)果顯示，運輸應(yīng)激2h后，二花臉仔豬血清中的CK活性顯著升高 (P<0.05)，皮

3、特蘭仔豬血清中的CK含量升高，差異極顯著(P<0.01)；二花臉和皮特蘭仔豬血清中AST的活性在運輸應(yīng)激后均顯著高于對照組(P<0.05)。 病理組織學(xué)檢測結(jié)果表明，二花臉和皮特蘭兩個品種仔豬在運輸應(yīng)激2 h后，其心臟、肝臟、腎臟和胃均顯示不同程度的以實質(zhì)細胞呈現(xiàn)急性變性為特征的組織損傷，其中尤其以皮特蘭仔豬的病理損傷表現(xiàn)更為明顯，而兩個品種的對照組仔豬均未見明顯的病理變化。 Hsp47和Hsp60在二花臉和皮特蘭這兩

4、個品種仔豬心臟、肝臟、腎臟和胃中的免疫組織化學(xué)定位研究結(jié)果分別顯示：Hsp47主要分布在心肌細胞的胞漿和胞核，肝小葉的中央靜脈管壁和竇狀隙內(nèi)皮細胞，腎小球毛細血管和腎遠曲小管上皮細胞胞漿和胞核，胃粘膜層和粘膜下層的疏松結(jié)締組織；Hsp60則主要分布于心肌細胞和肝細胞的胞漿，腎近曲小管上皮細胞的胞漿，胃底腺腺體細胞的邊緣，而且在組織細胞病理損傷越明顯的部位，其中的Hsp60陽性信號越弱，這種現(xiàn)象尤其以心臟和肝臟中的表現(xiàn)更為明顯。

5、 Hsp47和Hsp60在二花臉和皮特蘭這兩個品種仔豬心臟、肝臟、腎臟和胃中的酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA)定量研究結(jié)果表明，經(jīng)過2h的運輸應(yīng)激后，Hsp47在兩個品種仔豬的心臟和肝臟中的含量變化差異均不顯著，但在皮特蘭仔豬的腎臟和胃中含量則顯著升高(P<0.05)，Hsp47在二花臉仔豬的腎臟和胃中的含量變化差異不顯著；Hsp60在兩個品種仔豬的心臟中含量顯著減少(P<0.01)，在胃中的含量明顯增加運輸應(yīng)激仔豬組織的應(yīng)激性損傷及H

6、sp47、Hsp60表達(P<0.05)，Hsp60在皮特蘭仔豬肝臟中的含量顯著減少(P<0.05)，在二花臉仔豬肝臟中的含量變化差異不顯著，兩個品種仔豬腎臟中Hsp60的含量變化差異均不顯著。 以上試驗研究結(jié)果表明：(1)經(jīng)過2h的運輸應(yīng)激后，運輸組仔豬的心臟、肝臟、腎臟和胃均顯示不同程度的以實質(zhì)細胞呈現(xiàn)急性變性為特征的病理損傷，組織損傷尤其以皮特蘭仔豬的表現(xiàn)更為明顯，說明皮特蘭仔豬作為應(yīng)激敏感豬，更容易在運輸中受到應(yīng)激性損傷

7、.(2)免疫組織化學(xué)定位檢測顯示，病理損傷越明顯的組織細胞處，其中的Hsp60陽性信號越弱，說明組織的應(yīng)激性損傷與Hsp60的表達有一定關(guān)系.(3)2h的運輸應(yīng)激后，Hsp47在皮特蘭仔豬腎臟和胃中顯著升高，Hsp60在皮特蘭仔豬肝臟中顯著減少，而這兩種不同家族的蛋白在二花臉仔豬的相應(yīng)組織中變化差異不顯著，提示二花臉仔豬更能適應(yīng)運輸所致的應(yīng)激，而皮特蘭作為應(yīng)激敏感豬，受到刺激后會迅速引起組織中Hsp47和Hsp60的表達異常.(4)二花