CpG ODN對真菌性角膜炎病理改變的影響及免疫機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的：探討CpG寡聚脫氧核苷酸(CpGODN)對小鼠真菌性角膜炎病理改變的影響及可能的免疫作用機(jī)制。
　　 方法：角膜基質(zhì)注射法建立BALB/c白色念珠菌性及茄病鐮刀菌性角膜炎模型，按照治療方法不同分為以下五個實驗組：不治療組(A組)、感染同時結(jié)膜下注射CpGODN組（B組）、感染同時結(jié)膜下注射nonCpGODN組（C組）、感染前48小時預(yù)先結(jié)膜下注射CpGODN組(D組)及感染前48小時預(yù)先結(jié)膜下注射nonCpGODN組(E組

2、)。觀察記錄小鼠角膜真菌感染后的角膜大體病變特點(diǎn)和臨床病理損害評分，HE/PAS染色檢查角膜病理改變及真菌生長情況，真菌培養(yǎng)計算角膜真菌載菌量，ELISA法檢測白色念珠菌性角膜炎小鼠角膜、外周血清及體外培養(yǎng)脾細(xì)胞中IL-12、IFNγ、IL-10、MCP-1及真菌特異性抗體IgG、IgM、IgA水平，免疫組化檢測白色念珠菌感染后角膜組織中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞侵潤情況。
　　 結(jié)果：無論是白色念珠菌還是茄病鐮刀菌FK，感染

3、前48hr預(yù)先給予CpGODN結(jié)膜下注射對角膜真菌感染的小鼠有明顯的免疫保護(hù)作用，能明顯減輕小鼠角膜組織的病理改變，與其他各組相比，顯著降低了角膜臨床病理損害評分(p<0.05)，并可有效地減少角膜組織的真菌載菌量(p<0.05)，有利于真菌病原體的清除以及角膜潰瘍的愈合，病程明顯縮短，并不加重角膜組織的炎癥性病理損傷；而感染同時給予CpGODN結(jié)膜下注射對真菌性角膜炎小鼠無明顯的保護(hù)或治療作用，角膜臨床病理損害評分及角膜組織的真菌載菌

4、量與其他各組無明顯差異(p>0.05)。在白色念珠菌感染小鼠角膜后，CpGODN預(yù)先注射組D組小鼠角膜感染后，其血清及角膜組織中IL-12、IFN-γ、IL-10及MCP-1的水平均有不同程度的升高，以IL-12水平的升高最為顯著(p<0.05);IL-12水平從感染第一天驟升后，至感染第14天均持續(xù)較高水平，始終顯著高于A組、C組、D組及E組(p<0.05);IL-10于感染1天驟升后略降低，至第14天接近于正常水平，其感染第一天水平

5、低于D組(p>0.05)，但仍明顯高于A組、C組及E組(p<0.05)；IFN-γ于感染第一天后開始均逐漸升高。而CpGODN感染同時注射的D組小鼠角膜感染后，其血清及角膜組織中的IL-12、IFN-γ在感染第一天也明顯升高，CpGODN感染同時注射組比不注射組小鼠角膜組織及血清中也可產(chǎn)生更多的Th1型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ(p<0.05)，但I(xiàn)L-12水平顯著低于B組(p<0.05)；與此同時其感染第一天Th2型細(xì)胞因子IL-

6、10及趨化因子MCP-1水平的升高的程度也顯著高于A組、C組、D組及E組(p<0.05)?？傮w上，CpGODN注射組比不注射組小鼠角膜組織及血清中可產(chǎn)生更多的Th1型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ(p<0.05)，并且感染早期D組小鼠角膜及血清比B組及其他各組表現(xiàn)了更為強(qiáng)烈的Th1型免疫偏移。同時，CpGODN注射組比不注射組的小鼠脾細(xì)胞在體外培養(yǎng)時也可產(chǎn)生更多的Th1型細(xì)胞因子IL-12及IFN-γ(p<0.05)。各組小鼠角膜、血清

7、及體外培養(yǎng)的脾細(xì)胞中特異性抗體IgG、IgM的IgA水平在感染早期均未見明顯變化。免疫組化結(jié)果顯示，CpGODN注射組的小鼠在感染早期比不注射組的小鼠角膜內(nèi)可見更多的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤。
　　 結(jié)論：
　　 本實驗結(jié)果顯示，CpGODN預(yù)先處理可以激活宿主的抗真菌免疫反應(yīng)，對小鼠角膜真菌感染具有明顯的免疫保護(hù)作用，其可能的免疫作用機(jī)制是CpGODN預(yù)先處理能促進(jìn)小鼠全身及局部分泌Th1型細(xì)胞因子、促使免疫