亞低溫治療對缺血性腦損傷中熱休克蛋白表達的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用線栓法建立穩(wěn)定可靠的大鼠大腦中動脈閉塞(MCAO)模型，以提高腦缺血試驗研究結(jié)果的可靠性。腦梗死是指腦部血液供應(yīng)障礙，缺血、缺氧引起腦組織壞死軟化。梗死病灶系由其中心的缺血中心區(qū)和其周圍的缺血半暗帶組成。缺血中心區(qū)由于腦血流量嚴重不足或完全缺血致腦細胞死亡。而缺血半暗帶內(nèi)由于側(cè)支循環(huán)存在，仍可獲得部分血液供應(yīng)，神經(jīng)細胞功能雖受損但短期內(nèi)尚存活，處于可逆狀態(tài)，如在有效時間內(nèi)及時恢復(fù)血液供應(yīng)，則腦代謝障礙得以恢復(fù)，神經(jīng)細胞可以存活

2、并可以恢復(fù)功能。 熱休克蛋白是一種病理條件下產(chǎn)生的應(yīng)激蛋白，在某些環(huán)境因素及應(yīng)激刺激如缺血、缺氧、病毒感染、重金屬離子、DNA損傷及熱的作用后產(chǎn)生，具有保護神經(jīng)細胞免受應(yīng)激反應(yīng)損傷的作用，主要在腦梗死的缺血半暗帶中表達。通過測定不同溫度下腦損傷后熱休克蛋白表達的多少，來評估腦損傷后缺血半暗帶的大小，探討急性腦血管時如何盡可能地減小缺血半暗帶，以提高腦血管病的治療水平，降低致殘、致死率。 低溫一般分為輕度低溫(mild h

3、ypothermia)(33～35℃)；中度低溫(moderate hypothermia)(28～32℃)；深度低溫(profoundhypothermia) (17～27℃)；超深低溫(ultraprofoundhypothermia)(2～1.6℃)；亞低溫一般指32～35℃的低溫。研究實驗發(fā)現(xiàn)，在腦缺血前、缺血期間和缺血早期給予亞低溫治療，可明顯減輕腦缺血的病理損傷，促進腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)。 方法：健康SD大鼠48只

4、，體重300-330g，隨機分為兩組：亞低溫組和常溫組，每組動物再分為12小時、24小時、48小時三個時間點亞組。10％水合氯醛腹腔麻醉成功后，亞低溫組頭枕冰袋，測顳肌溫度低于35℃時開始手術(shù)，亞低溫組使低溫保持在35<'0>C-32℃之間，低溫持續(xù)2小時。常溫組不枕冰袋。選頸部正中切口，從兩側(cè)頜下腺之間剪開淺筋膜，顯露一側(cè)胸鎖乳突肌。鈍性分離乳突肌與胸骨舌骨肌間肌間隙，暴露頸總動脈和迷走神經(jīng)。在頸總動脈深面穿一細線，鈍性分離頸內(nèi)、外動

5、脈，用電凝器將頸外動脈的分支甲狀腺上動脈、枕動脈燒斷。游離頸外動脈約3～4mm，在其深面穿二條細線，近側(cè)者打一活結(jié)，推向頸外動脈根部，遠側(cè)者結(jié)扎頸外動脈，并在結(jié)扎線遠側(cè)燒斷頸外動脈。分離頸內(nèi)動脈及其分支翼腭動脈，用二個動脈夾分別夾閉頸內(nèi)動脈和頸總動脈。在頸外動脈上剪一小口，用制備的插線(在插線20mm處做一標記)插入頸外動脈至頸總動脈，收緊頸外動脈根部線之活結(jié)，松開頸內(nèi)動脈的動脈夾，將頸外動脈拉向下方，使其與頸內(nèi)動脈成直線，將插線經(jīng)頸總

6、動脈分叉處插入頸內(nèi)動脈。插入頸內(nèi)動脈時應(yīng)注意勿使插線誤入翼腭動脈。插線入顱后，收緊頸動脈根部線的活結(jié)，松開頸總動脈夾，觀察有無出血，抽出頸總動脈深面的細線。連續(xù)縫合手術(shù)切口，注意動物保暖，待其清醒后觀察其行為和癥狀。選入標準：①提尾后右前肢內(nèi)收屈曲②爬行時向右側(cè)劃圈(“追尾現(xiàn)象”)③站立時向右側(cè)傾倒。凡具有上述體征之一者可入選本實驗。符合入選標準后分別于12小時、24小時、48小時進行神經(jīng)功能評分后處死，取腦標本進行TTC染色測定腦梗死

7、體積的大小，用HE染色觀察神經(jīng)細胞的凋亡，用免疫組化方法觀察熱休克蛋白的表達情況。采用統(tǒng)計學方法t檢驗分析實驗結(jié)果。 結(jié)果：實驗表明，同一亞組比較，亞低溫組大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)明顯快于常溫組，病理切片HE染色亞低溫組神經(jīng)元細胞凋亡明顯少于常溫組。TTC染色后所測腦梗死體積同一亞組比較亞低溫組小于常溫組，其中24小時亞組和48小時亞組有顯著性差異(P<0.05)。熱休克蛋白表達計數(shù)同一亞組比較亞低溫組明顯少于常溫組，在24小時亞組和4