嗜堿性粒細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用.pdf

1、目的:
　　評(píng)估外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和活化程度的變化可否作為SLE活動(dòng)度的監(jiān)測指標(biāo)，為SLE病情監(jiān)測尋找新方法;探討SLE患者外周血微環(huán)境對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞活化的影響以及介導(dǎo)其活化的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.臨床實(shí)驗(yàn)
　　(1)收集我院SLE患者外周血標(biāo)本150例，所有入選病例符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997推薦的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，并詳細(xì)記錄其病史和用藥史，排除合并感染、過敏、其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病和共患其他免疫性疾病的患者

2、，對(duì)所有SLE患者進(jìn)行SLEDAI評(píng)分，包括初診SLE尚未使用激素和免疫抑制劑患者，初診患者分別收集在激素和免疫抑制劑治療前、治療后兩周、一個(gè)月、二個(gè)月和三個(gè)月的外周血標(biāo)本。收集40例健康人和40例尚未使用激素治療的原發(fā)性腎病綜合征(PNS)患者外周血作為對(duì)照;
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)觀察不同活動(dòng)期SLE患者、健康人和PNS患者外周血嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和CD203c、TLR9平均熒光強(qiáng)度(MFI)的差異;分析嗜堿性粒細(xì)胞的數(shù)量與SLE

3、DAI評(píng)分、C3、C4、抗ds-DNA抗體的相關(guān)性;動(dòng)態(tài)觀察首診SLE患者嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量、活化度和SLEDAI評(píng)分的變化趨勢。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　(1)以人嗜堿性粒細(xì)胞系KU-812為研究對(duì)象，誘導(dǎo)分化成熟并轉(zhuǎn)染含NF-κB熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒后，分別用健康人血清、健康人血清+TLR9激動(dòng)劑、SLE患者血清、SLE患者血清+TLR9阻斷劑處理KU-812細(xì)胞24h。
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測KU-812細(xì)胞TL

4、R9 MFI，檢測NF-κB通路激活情況以及ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-6和TNF-α的水平。
　　結(jié)果:
　　1.活動(dòng)期和非活動(dòng)期SLE患者外周血嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較腎綜患者和正常人均顯著減少（P均＜0.05）、活化程度卻顯著增高（高表達(dá)CD203c）（P均＜0.05）。SLE患者外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量與血清C3(r=0.410，P＜0.01)、C4(r=0.324,P＜0.01)水平呈正相關(guān)，與SLEDAI評(píng)分(r=-0.

5、568，P＜0.01)、抗ds-DNA抗體(r=-0.519，P＜0.01)成負(fù)相關(guān);追蹤初診SLE患者發(fā)現(xiàn):隨著SLEDAI評(píng)分的下降，外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量上升，活化程度下降，且在正規(guī)治療兩周后即開始變化(P＜0.05)，監(jiān)測疾病活動(dòng)早于SLEDAI評(píng)分。
　　2.SLE患者外周嗜堿性粒細(xì)胞較正常人顯著高表達(dá)TLR9(P＜0.05);SLE患者血清可誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞株(KU-812細(xì)胞)高表達(dá)TLR9、激活胞內(nèi)NF-κB通路并分