四逆湯傳統(tǒng)飲片與超微飲片化學(xué)成分和藥效的對(duì)比研究.pdf

1、目的：現(xiàn)在，對(duì)超微飲片的研究大多數(shù)集中在可全藥服用的中藥材(如人參、西洋參、三七等)上。研究表明，此類中藥材制成超微飲片能提高有效成分的提取率和藥效。但毒性中藥材制成超微飲片后直接服用是否具有可行性，鮮有人研究。本研究擬對(duì)用傳統(tǒng)飲片和超微飲片組方的四逆湯中化學(xué)成份和藥效進(jìn)行比較分析，為臨床應(yīng)用四逆湯超微飲片提供依據(jù)。 方法：選取含有毒性中藥材附子的四逆湯為受試藥物，用HPLC法測(cè)定傳統(tǒng)飲片和超微飲片中的主要化學(xué)成份如烏頭堿、新烏

2、頭堿、次烏頭堿、甘草次酸等的含量。分別用傳統(tǒng)飲片組方的四逆湯水煎煮液及超微飲片組方的四逆湯浸泡液全藥喂食家兔制備含藥血清，將含藥血清加入蟾蜍離體心臟灌流液中，觀察其對(duì)蟾蜍心輸出量、心肌收縮力、心率的影響。 結(jié)果：(一)建立了一種同時(shí)測(cè)定四逆湯中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿的高效液相色譜法，色譜柱：Kromasil c<,18>柱(150衄×4.6mm，5μm)，保護(hù)柱：Phenomenex C<,18>柱：流動(dòng)相：30 mmol·

3、L<'-1>醋酸銨(含2.5‰醋酸，5﹪0 NH<,3>·H<,2>O，pH=8.5)：乙腈(67：33)；流速：1.6 mL·min<'-1>；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：40℃；這樣，既降低了流動(dòng)相的pH值，有效地保護(hù)了色譜柱，又實(shí)現(xiàn)了三種雙酯型烏頭類生物堿在30分鐘內(nèi)完全分離，四逆湯水提取液中其他成分不干擾測(cè)定。烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿的進(jìn)樣量分別在0.0047～0.188 μg(r=0.9995)，0.005～0.20 μ

4、g(r=0.9998)，0.0052～0.204 μ g(r=0.9999)范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。平均回收率為96.39﹪～97.58﹪(RSD=2.01～2.59﹪)。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、分離效果好、線性范圍寬、靈敏度高，可用于四逆湯制劑的質(zhì)量控制。 (二)建立了一種測(cè)定四逆湯中甘草次酸含量的高效液相色譜法，色譜柱：Kromasil C<,18>柱(150×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：3.6﹪乙酸-甲醇(20：80

5、)，流速1.0 mL·min<'-1>，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：30℃。甘草次酸的進(jìn)樣量在0.01～2.5 μ g(r=0.9994)范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。傳統(tǒng)飲片和超微飲片的平均回收率分別為97.70﹪(RSD=2.36﹪)，97.1﹪(RSD=2.50﹪)。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、分離效果好、線性范圍寬、靈敏度高，為四逆湯制劑的質(zhì)量控制提供了又一個(gè)考察指標(biāo)。 (三)采用HPLC法測(cè)定四逆湯傳統(tǒng)飲片水煎煮液及超微飲

6、片浸泡液中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿及甘草次酸的含量，結(jié)果顯示四逆湯傳統(tǒng)飲片水煎煮液中上述成分的含量均低于超微飲片浸泡液的含量。因?yàn)樵谒崛l件下，雙酯型烏頭類生物堿在高溫煎煮過(guò)程中發(fā)生了水解，而且與甘草中甘草酸和甘草次酸發(fā)生相互化學(xué)作用生成了不溶性的絡(luò)合物，導(dǎo)致傳統(tǒng)飲片組方四逆湯中的毒性成分——雙酯型烏頭類生物堿的提取率明顯低于超微飲片，也導(dǎo)致傳統(tǒng)飲片中甘草次酸的提取率也低于超微飲片，傳統(tǒng)飲片的煎煮過(guò)程大大降低了雙酯型烏頭類生物堿的含

7、量，也就降低了其毒性； (四)用四逆湯傳統(tǒng)飲片水煎煮液及超微飲片浸泡液全藥喂食家兔制備含藥血清，將含藥血清加入蟾蜍離體心臟灌流液中，以觀察其對(duì)蟾蜍心輸出量、心肌收縮力、心率的影響。結(jié)果顯示分別用傳統(tǒng)飲片及其超微飲片的四逆湯與空白對(duì)照組相比都能顯著增加蟾蜍心臟的心輸出量、心肌收縮力、心率(P<0.05)，但兩者之間的作用強(qiáng)度無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：(一)本研究建立了一種HPLC法可在30分鐘內(nèi)同時(shí)分離四逆湯中

8、烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿，可用于四逆湯制劑的質(zhì)量控制。建立了一種測(cè)定四逆湯中甘草次酸含量的高效液相色譜法，為四逆湯制劑的質(zhì)量控制提供了又一個(gè)考察指標(biāo)。 (二)傳統(tǒng)飲片四逆湯的煎煮過(guò)程和超微飲片四逆湯的浸泡過(guò)程對(duì)四逆湯中化學(xué)成分的影響不一致，超微飲片四逆湯中的毒性成分——雙酯型烏頭類生物堿提取率明顯增加，也導(dǎo)致其中甘草次酸的提取率明顯增加。 (三)在相同給藥劑量的情況下，超微飲片制成的四逆湯，與傳統(tǒng)飲片四逆湯的主要藥效—