BrdU標(biāo)記檢測(cè)維甲酸對(duì)小鼠腭突細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、本文研究目的：通過觀察維甲酸誘導(dǎo)的腭裂小鼠腭突細(xì)胞的增殖發(fā)育，以探討腭裂形成的機(jī)制。 研究方法：選取10周齡左右SPF級(jí)C57BL/6J近交系小鼠，于第一天晚8時(shí)按雌雄比2：1合籠交配。第二天上午8時(shí)檢測(cè)陰栓，將陰栓陽性的雌鼠記為妊娠0天(gestation0day,GD0)，共得到孕鼠24只，將這些孕鼠隨機(jī)分為兩組：第一組為對(duì)照組，共8只；第二組為實(shí)驗(yàn)組，共16只。在妊娠第10天下午1時(shí)，實(shí)驗(yàn)組孕鼠按100mg/kg體重灌胃維

2、甲酸，對(duì)照組灌胃植物油0.2ml。全部孕鼠分別于妊娠13天、14天、15天、16天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死，處死前半小時(shí)均按100mg/kg體重腹腔注射BrdU。用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)BrdU在GD13,GD14,GD15及Gd16的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠腭突中的表達(dá)和分布變化。然后用標(biāo)記指數(shù)(LI)分析。 研究結(jié)果： 1.在GD13～GD16的腭突細(xì)胞發(fā)育過程中，維甲酸誘導(dǎo)的腭裂小鼠和對(duì)照組小鼠的腭突間充質(zhì)細(xì)胞(EPM)的LI值有顯

3、著差異(GD13P＜0.01，GD14P＜0.01，GD15P＜0.01，GD16P＜0.01)。 2.腭突中嵴上皮細(xì)胞(MEE)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別在GD13，GD14的LI值無明顯差異(GD13P＞0.05，GD14P＞0.05)；實(shí)驗(yàn)組在GD15MEE細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的LI值有顯著差異(P＜0.01=。在15，16時(shí)間點(diǎn)，維甲酸誘導(dǎo)的腭裂小鼠和對(duì)照組小鼠在腭突鼻腔面上皮的LI值亦無明顯差異(GD15P＞0.05，GD16

4、P＞0.05)；腭突口腔面上皮的LI值在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(GD15P＜0.05，GD16P＜0.05)。 研究結(jié)論： 1.實(shí)驗(yàn)組小鼠腭突發(fā)育的垂直期、上抬期、融合期中，BrdU表達(dá)陽性的細(xì)胞數(shù)均明顯低于同期對(duì)照組的陽性細(xì)胞數(shù)。提示外源性RA的攝入引起EPM細(xì)胞增殖抑制，腭突形態(tài)發(fā)育障礙，不能與對(duì)側(cè)的腭突接觸融合而導(dǎo)致腭裂。 2.外源性RA對(duì)同期不同部位的MEE細(xì)胞有不同的作用機(jī)制。作用時(shí)效顯