全反式維甲酸對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞血管生成的影響.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、背景及目的:
   2012年經(jīng)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì),我國惡性腫瘤發(fā)病前十位主要是肺癌、消化系統(tǒng)癌(胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、食管癌、胰腺癌)、乳腺癌、淋巴瘤、膀胱癌、甲狀腺癌。這十類腫瘤占全部惡性腫瘤發(fā)病的76.39%。根據(jù)第21屆世界抗癌大會(huì)公布的數(shù)據(jù),中國癌癥發(fā)生率目前處于快速上升期。在河南,目前食管癌發(fā)病率仍較其它地區(qū)高,并且,男性罹患肺惡性腫瘤及女性罹患乳腺癌的發(fā)生率持高不下,抗癌治療在河南的衛(wèi)生系統(tǒng)總費(fèi)用支出中占很大比例。

2、>   惡性腫瘤的內(nèi)科治療在基礎(chǔ)研究成果的基礎(chǔ)上,正在不斷推進(jìn),較大幅度的提高了癌癥生存率。自1971年,由哈佛大學(xué)judahfolkman博士提出腫瘤生長(zhǎng)的血管依賴性理論后,全球腫瘤內(nèi)科專家、藥物專家等在腫瘤治療中創(chuàng)出一種全新的有別于腫瘤殺死概念的治療策略,即抗血管生成+抗細(xì)胞增殖的A+策略。
   腫瘤細(xì)胞引起的新生血管過程受局部組織中分泌的調(diào)節(jié)因子調(diào)控。起促進(jìn)作用的調(diào)節(jié)因子如下:血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VascularEn

3、dothelialGrowthFactor,VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicFibroblastGrowthFactors,bFGF)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(Platelet-DerivedGrowthfactor,PDGF)、血管生成素(Angiopoietin,Ang)、腫瘤壞死因子-α(TumorNecrosisFactor-α,TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TransformingGrowthFactor-β,TG

4、F-β)、表皮生長(zhǎng)因子(EpidemalGrowthFactor,EGF)、纖溶酶原激活因子(PlasminogenActivator,PA)等,另外還有一些小分子的脂類、核苷酸及維生素。而干擾素-α(Interferon-α,IFN-α)、內(nèi)皮細(xì)胞抑制素(endostatin)、血管抑制素(angiostatin)、血小板因子4、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子可溶性受體等發(fā)揮抑制作用。
   在腫瘤細(xì)胞促進(jìn)新生血管過程中,VEGF起到

5、非常重要及關(guān)鍵的作用?;A(chǔ)實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造體外的血管生成模型,其中顯示VEGF及其受體可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新的血管生成,故其目前作為主要血管生成抑制劑的靶點(diǎn)。臨床治療腫瘤方面癡線以VEGF及其受體為靶點(diǎn)的一種治療方法,貝伐單抗(bevacizumab),又名:重組人源性抗VEGF單克隆抗體貝伐單抗,是對(duì)這一策略由理論變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)的有力證據(jù),貝伐單抗可與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)結(jié)合,阻斷其與受體在內(nèi)皮細(xì)胞表面結(jié)合,進(jìn)而阻斷器介導(dǎo)的血管生成過程。之

6、后由我國自主研發(fā)的重組人血管內(nèi)皮抑制素(恩度)就是血管生成抑制類生物制品,其目標(biāo)靶點(diǎn)亦為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)生成因子。
   維甲酸為維生素A的衍生物,在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng),分化、凋亡等過程中起重要作用,維甲酸類化合物初始為治療銀屑病的有效藥物,因其可明顯控制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖及炎癥細(xì)胞浸潤,后由我國學(xué)者王振義首次使用全反式維甲酸(ATRA)治療急性非淋巴細(xì)胞白血病中的M3型,獲得了肯定的療效。許多研究證明,維甲酸類化合物作用廣泛,可誘導(dǎo)腫瘤

7、細(xì)胞分化,抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用,其中以全反式維甲酸抗腫瘤作用研究更確切。目前作為著名的腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑的代表。但有基礎(chǔ)研究表明全反式維甲酸具有一定血管抑制作用。
   本實(shí)驗(yàn)使用ATRA體外作用于食管癌細(xì)胞EC109、肺腺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,觀察其對(duì)其作用及對(duì)VEGF因子的表達(dá)的作用。
   材料和方法:
   1.體外分別培養(yǎng)食管癌細(xì)胞EC109、肺腺癌細(xì)胞A549

8、及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,取呈對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞,分別給予含10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mol/l濃度ATRA的培養(yǎng)液連續(xù)培養(yǎng)24、48、72、96h。
   2.應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度不同時(shí)間的ATRA分別作用于三種腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞抑制率。
   3.使用ELISA測(cè)定72h后不同濃度ATRA對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白表達(dá)、分泌的影響。使用單因素方差檢測(cè)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。<

9、br>   結(jié)果:
   1.MTT法
   將含5種不同濃度的ATRA培養(yǎng)液培養(yǎng)3種腫瘤細(xì)胞,分別在24h、48h、72h、96h測(cè)定其A490,24h時(shí)藥物對(duì)各細(xì)胞抑制作用均不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他的時(shí)間點(diǎn)ATRA有不同程度的細(xì)胞增殖抑制作用,在96h時(shí)效應(yīng)達(dá)最高,并呈劑量相關(guān)性,其中10-3mol/l濃度的抑制率最高。食管癌細(xì)胞EC109、肺腺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231最高抑

10、制率最高分別為90.0%,51.2%,60.2%。與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組A490無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,表明溶媒對(duì)細(xì)胞無增殖抑制性。
   2.ELISA法
   經(jīng)過藥物作用72h后,VEGF蛋白濃度隨藥物濃度的升高而下降,以10-3mol/l藥物濃度的VEGF蛋白表達(dá)量下降最為顯著,相對(duì)于空白對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而食管癌細(xì)胞EC109、肺腺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中以食管癌細(xì)

11、胞VEGF蛋白濃度降低最為顯著。
   結(jié)論:
   1.全反式維甲酸對(duì)食管癌細(xì)胞EC109、肺腺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖生長(zhǎng)具有抑制作用,該作用具有劑量及時(shí)間依賴性。
   2.全反式維甲酸體外對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用,主要通過下調(diào)其VEGF蛋白的表達(dá),從而影響其血管生成。
   3.全反式維甲酸對(duì)食管癌細(xì)胞EC109的增殖抑制作用強(qiáng)于肺腺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MDA-M

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