整合素avβ-,3-單克隆抗體對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥治療作用的研究.pdf

1、研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosisEM，簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)是指在子宮內(nèi)膜以外的部位出現(xiàn)子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)細(xì)胞。主要引起不孕、月經(jīng)紊亂、痛經(jīng)等，在育齡婦女中發(fā)病率為10％-15％，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，缺少有效的治療方法。整合素avβ3是細(xì)胞膜上的一種糖蛋白，具有使細(xì)胞－細(xì)胞外基質(zhì)黏附、血小板聚集、免疫、組織修復(fù)、腫瘤侵潤(rùn)、血管生長(zhǎng)等功能。腫瘤的血管新生及轉(zhuǎn)移與具有功能活性的整合素avβ3有關(guān)。現(xiàn)普遍認(rèn)為EM患者子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有

2、黏附、侵襲和血管新生等類似惡性腫瘤的生物學(xué)行為，有效的阻斷這一環(huán)節(jié)有可能成為治療子宮內(nèi)膜異位癥的新途徑。本文主要在細(xì)胞及動(dòng)物水平探討整合素avβ3單克隆抗體對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用。 研究目的：研究整合素avβ3單克隆抗體對(duì)EM患者在位內(nèi)膜細(xì)胞黏附作用的影響。探討整合素avβ3單克隆抗體對(duì)EM患者在位內(nèi)膜組織對(duì)雞胚尿囊膜促血管生成過程的抑制作用。建立SCID小鼠EM動(dòng)物模型，觀察整合素avβ3單克隆抗體對(duì)小鼠移植異位病灶生長(zhǎng)的

3、抑制作用。 材料和方法：1、取3例EM患者在位內(nèi)膜進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。將濃度為1×104/m1細(xì)胞懸液置于用纖維結(jié)合蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)包被的96孔培養(yǎng)板，每孔100ul?？贵w為整合素avβ3單克隆抗體Lm609和7E3，抗體濃度分別為80ug/ml、40ug/ml、20ug/ml，10ug/ml，空白對(duì)照加同體積PBS。每個(gè)濃度重復(fù)3個(gè)孔。37℃孵育1小時(shí)后。每孔加15u1MTT，繼續(xù)孵育4小時(shí)。棄去液體，每孔加

4、100ulDMSO，震蕩20分鐘。在492nm波長(zhǎng)測(cè)每個(gè)孔的OD值。每例細(xì)胞重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。 2、1例EM患者在位內(nèi)膜，剪成1mm3小塊。選取60枚9日齡雞胚，雞胚分為3組，一組為空白對(duì)照，另兩組將標(biāo)本置于尿囊膜上。一組加PBS，一組加Lm609。2天后取出尿囊膜，觀察血管生長(zhǎng)情況。 3、10只SCID小鼠分2組。取4例EM患者在位內(nèi)膜標(biāo)本，混合剪碎成1mm3組織塊。治療組組織塊先與Lm609對(duì)照組與PBS共孵育后，分別注

5、入小鼠腹部皮下，一周后，治療組尾靜脈注射Lm609，每周2次，每次250ug；對(duì)照組注射相應(yīng)體積PBS。治療3周后處死小鼠，測(cè)量標(biāo)本，用免疫組化法測(cè)微血管密度。 結(jié)果：1、與抗體共孵育的內(nèi)膜細(xì)胞黏附能力低于對(duì)照組(P＜0.05)。各濃度之間無(wú)差異(P＞0.05)。 2、雞胚尿囊膜加組織塊組血管生成強(qiáng)于空白對(duì)照組(P＜0.05)，抗體治療組血管生成弱于對(duì)照組(P＜0.05)。 3、抗體治療組小鼠的異位病灶重量、體積