宮內(nèi)缺氧對成年子代大鼠肝纖維化易感性的影響.pdf

1、目的：⑴探討宮內(nèi)缺氧對胎鼠及子代大鼠(1、3、6月)肝臟生長發(fā)育的影響。⑵研究CCl4對宮內(nèi)缺氧子代大鼠(6月)肝纖維化易感性的影響。
　　方法：將大鼠從妊娠第4天至第20天(gestation day,GD4-20)放入缺氧環(huán)境飼養(yǎng)(O2濃度10±0.5％),建立大鼠宮內(nèi)缺氧模型。實(shí)驗(yàn)分為兩組:常氧對照組(簡稱對照組),宮內(nèi)缺氧組(簡稱缺氧組)。檢測兩組中胎鼠(GD20)血?dú)饧把弘x子指標(biāo);稱量兩組的胎鼠及子代大鼠(1、3、6月

2、)的體重、肝臟重量,計(jì)算其肝比重;檢測兩組樣品的血清生化指標(biāo),包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的變化;分別對兩組的肝臟進(jìn)行HE染色后光鏡下觀察肝組織病理改變;Western-blot印跡法檢測肝組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1, HIF-1α)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α

3、)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)蛋白的表達(dá)。取6月齡雄性Sprague-Dawley(SD)子代大鼠隨機(jī)分4組:正常子代組(n=15),缺氧子代組(n=15),正常子代+CCl4組(n=50),缺氧子代+CCl4組(n=50)。正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組均給予40％CCl4植物油混懸液腹腔注射,1 ml/kg,3次/周,共計(jì)8周。正常子代組和缺氧子代組均給予同劑量的生理鹽水腹腔注射,處理方法同上。分別于給藥1、2、3、4、

4、6、8周末隨機(jī)取6只大鼠,同一時(shí)間點(diǎn)從正常子代組和缺氧子代組各取2只處死,稱量體重、肝臟重量;分別對上述樣本肝臟行HE染色和Masson膠原纖維染色,HE染色光鏡觀察肝組織改變,Masson膠原纖維染色光鏡觀察肝纖維化過程;Western-blot印跡法檢測肝組織TGF-β1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：①大鼠宮內(nèi)缺氧模型建立:與對照組相比,宮內(nèi)缺氧降低胎兒血液中pO2和SO2％水平;而胎鼠血液中的pH、pCO2、Hb等指標(biāo)沒有明顯的影

5、響。②與對照組相比,缺氧組胎鼠及1、3月齡子代大鼠血漿中ALT、AST有顯著性差異,而6月齡子代大鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與對照組相比,缺氧組胎鼠的體重、肝重、肝比重有顯著性差異;而1、3、6月齡子代大鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③肝組織HE染色:與對照組相比,缺氧組胎鼠肝組織結(jié)構(gòu)松散,肝細(xì)胞索排列紊亂,細(xì)胞質(zhì)疏松化,細(xì)胞核相對較小。出生后1、3月齡缺氧組大鼠肝細(xì)胞索仍排列紊亂,細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量脂肪變性的空泡。6月齡時(shí),肝細(xì)胞索排列有序,在中央靜脈周圍有少

6、量肝細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)脂肪變性的空泡。④肝組織HIF-1α、 IL-6及TNF-α蛋白:與對照組相比,缺氧組胎鼠及1、3月齡子代大鼠肝組織中HIF-1α、IL-6和TNF-α的表達(dá)量明顯增加。6月齡子代大鼠時(shí),三種蛋白的表達(dá)量有增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑤給予二次打擊后子代大鼠肝比重的變化:正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組的肝比重從第4周開始,隨著給藥時(shí)間延長而增加,且缺氧子代+CCl4組在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的肝比重顯著高于正常子代+CCl4

7、組。⑥肝組織形態(tài)學(xué)變化:正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組均隨著給藥時(shí)間的延長,肝組織出現(xiàn)不同程度的損傷。HE染色光鏡下可見,給藥第1周缺氧子代+CCl4組有少量肝細(xì)胞脂肪變性,第4周肝臟形成假小葉。而正常子代+CCl4組直到第8周才出現(xiàn)假小葉。Masson染色光鏡下可見,給藥1周缺氧子代+CCl4組有少量膠原纖維分布在門管區(qū),直到第4周肝組織中出現(xiàn)大量的膠原纖維,肝細(xì)胞出現(xiàn)大量的脂肪空泡;而正常子代+CCl4組直到第8周才出現(xiàn)

8、上述形態(tài)學(xué)變化。⑦肝組織中TGF-β1蛋白的表達(dá):隨著給藥時(shí)間的延長,正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組肝組織中TGF-β1蛋白的表達(dá)量均增加,在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)缺氧子代+CCl4組TGF-β1的表達(dá)水平顯著高于正常子代+CCl4組。
　　結(jié)論：宮內(nèi)缺氧導(dǎo)致了胎鼠供血供氧不足,胎鼠宮內(nèi)生長受限,尤其是肝臟發(fā)育受限及肝臟組織結(jié)構(gòu)發(fā)生病理改變。在低氧環(huán)境刺激胎鼠肝臟組織中HIF-1α的表達(dá)水平上調(diào),激活了HIF-1α蛋白通路,導(dǎo)致