活血化瘀通絡(luò)中藥合方及拆方對(duì)糖尿病脂肪肝大鼠的治療作用及對(duì)SOCS-3和SREBP-1c的影響.pdf

1、目的:隨著肥胖與糖尿病發(fā)病率的增加，糖尿病脂肪肝的發(fā)病率也明顯增加，若得不到有效治療，可進(jìn)一步發(fā)展為肝炎、肝硬化，甚至肝癌。肥胖伴發(fā)的胰島素抵抗是糖尿病和脂肪肝形成的共同作用機(jī)制，胰島素抵抗是指組織對(duì)胰島素反應(yīng)的敏感性降低。胰島素抵抗在2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，正常情況下，胰島素一方面通過抑制肝臟葡萄糖的輸出，另一方面通過促進(jìn)葡萄糖進(jìn)入肌肉組織使血漿葡萄糖維持在正常范圍，胰島素抵抗時(shí)不能有效地抑制肝臟葡萄糖的輸出和有效地促進(jìn)

2、葡萄糖進(jìn)入肌肉組織，從而引起血糖升高導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生;胰島素抵抗在脂肪肝的發(fā)病機(jī)制中亦發(fā)揮著重要作用，一方面胰島素抵抗促進(jìn)了脂肪分解為游離脂肪酸，游離脂肪酸隨血液進(jìn)入肝臟，在肝細(xì)胞內(nèi)合成脂肪;另一方面，胰島素抵抗可抑制肝細(xì)胞內(nèi)脂肪的分解代謝，引起肝細(xì)胞內(nèi)脂肪積聚，從而導(dǎo)致脂肪肝的形成，因此改善胰島素抵抗對(duì)糖尿病性脂肪肝有一定的治療作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制物-3(suppressors of cytokine sign

3、aling protein-3，SOCS-3)在胰島素抵抗和非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，SOCS-3一方面通過抑制胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，引起胰島素抵抗，另一方面通過上調(diào)肝臟類固醇條件元件結(jié)合蛋白-1c(Sterol regulatory element binding protein-1cSREBP-1c)促進(jìn)脂肪酸合成，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝臟沉積，形成脂肪肝。因此通過降低SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA的表達(dá)能有

4、效地治療糖尿病性脂肪肝。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察活血化瘀通絡(luò)中藥合方及拆方對(duì)糖尿病大鼠脂肪肝SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA表達(dá)的影響，探討其抗糖尿病性脂肪肝的作用及可能機(jī)制，為臨床應(yīng)用活血化瘀通絡(luò)中藥治療糖尿病性脂肪肝提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:將50只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥1組（活血組，丹參、川芎）、中藥2組（通絡(luò)組，水蛭、地龍）和中藥3組（合方組，水蛭、地龍、丹參、川芎），除正常組外，其余尾靜脈

5、注射鏈脲佐菌素(STZ)25 mg/kg，臨用前STZ按1％比例以檸檬酸緩沖液(pH4，0.1mmol/L)稀釋。于注射后72 h及1 wk時(shí)，尾靜脈采血，若隨機(jī)血糖大于或等于16.7 mmol/L，確定為糖尿病造模成功。用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)2 wk后，除正常組外，改為高脂飼料喂養(yǎng)。正常組和模型組予生理鹽水灌胃，中藥1、2、3組分別予活血中藥（丹參、川芎），通絡(luò)中藥（水蛭、地龍），合方中藥（水蛭、地龍、丹參、川芎）灌胃，中藥購(gòu)于河北省中醫(yī)院中

6、藥房，劑型為袋裝免煎劑，根據(jù)大鼠體重稱取相應(yīng)中藥1.2 g/(kg.d)，用2ml的沸水沖泡，涼至35℃左右灌胃;12wk后處死大鼠。蘇木素伊紅（HE）染色法觀察大鼠肝組織的形態(tài)學(xué)改變;生化法測(cè)量甘油三脂(TG)、膽固醇(TC)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST), RT-PCR法檢測(cè)肝組織SOCS-3 mRNA和SREBP-1c mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1大鼠一般情況
　　正常組大鼠營(yíng)養(yǎng)狀況良好，飲

7、食正常，反應(yīng)靈敏，體重呈持續(xù)性增加;其他各組大鼠營(yíng)養(yǎng)情況差，飲食少，體形消瘦，反應(yīng)遲鈍，煩躁易激惹。
　　2各組大鼠肝組織病理形態(tài)改變
　　正常組大鼠肝組織未發(fā)現(xiàn)脂肪變性;模型組2/3以上肝小葉的肝細(xì)胞都有脂肪變性，肝細(xì)胞腫大，充滿大小不等的脂肪空泡（脂滴），可見脂肪囊腫，伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有的還伴有一定程度的肝纖維結(jié)締組織增生;各藥物干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)脂肪滴減少，脂肪囊腫消失，轉(zhuǎn)為輕中度脂肪變性，脂肪變較模型組明顯減輕;合

8、方組較拆方組脂肪變減輕。
　　3各組大鼠肝組織TC、TG水平
　　與正常組相比，模型組及各藥物干預(yù)組大鼠血清TC、TG水平明顯升高（P＜0.05）;與模型組相比，各藥物干預(yù)組大鼠血清TC、TG水平有明顯降低（P＜0.05）;中藥各組間比較:中藥3組TC、TG水平比中藥1、2組低(P＜0.05);中藥2組的TC、TG水平比中藥1組低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4各組大鼠肝組織ALT、AST水平
　　與正

9、常組相比，模型組及各藥物干預(yù)組大鼠血清ALT、AST水平明顯升高（P＜0.05）;與模型組相比，各藥物干預(yù)組大鼠血清ALT、AST水平有明顯降低（P＜0.05）;中藥各組間比較:與中藥3組相比，中藥1、2組大鼠血清ALT、AST水平明顯升高（P＜0.05），中藥1組、2組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5各組大鼠肝組織SOCS-3和SREBP-1c表達(dá)
　　與正常組相比，模型組和各藥物干預(yù)組SOCS-3和SREBP-

10、1c表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P＜0.05）;與模型組相比，各藥物干預(yù)組SOCS-3和SREBP-1c表達(dá)均明顯減弱(P＜0.05);中藥各組間比較:與中藥3組相比，中藥1、2組SOCS-3和SREBP-1c表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P＜0.05），中藥1組、2組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　SOCS-3mRNA和SREBP-1 cmRNA表達(dá)水平Pearson相關(guān)分析結(jié)果:SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0

11、.985，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1活血化瘀通絡(luò)中藥合方及拆方能明顯降低糖尿病性脂肪肝大鼠肝功能及血脂水平，顯著改善大鼠肝臟脂肪變性，對(duì)糖尿病性脂肪肝有良好的治療作用。
　　2活血化瘀通絡(luò)中藥合方及拆方對(duì)糖尿病脂肪肝的治療作用可能與其降低SOCS-3 mRNA和SREBP-1c mRNA的表達(dá)，進(jìn)而改善胰島素抵抗、抑制脂肪酸合成有關(guān)。
　　3活血化瘀與通絡(luò)中藥在治療糖尿病性脂肪肝方面具有協(xié)同作用，兩者同