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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討細(xì)胞周期素E與P27蛋白在大鼠子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義;觀察復(fù)方莪術(shù)散對(duì)細(xì)胞周期蛋白E(Cyclin E)及P27在子宮內(nèi)膜異位癥大鼠異位內(nèi)膜表達(dá)的影響,從細(xì)胞周期調(diào)控的角度探討復(fù)方莪術(shù)散治療子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)機(jī)制。
方法:
1.選取健康成熟未交配的清潔級(jí)雌性Wistar大鼠60只,每只體重均在(200士20)g,不檢測(cè)其動(dòng)情期,采用自體移植法建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,測(cè)量其移植物大小,觀察其形態(tài)。
2、建模4周后二次剖腹,根據(jù)模型情況選擇納入與排除,將成膜無(wú)差別的大鼠隨機(jī)分為4組:復(fù)方莪術(shù)散高劑量組,復(fù)方莪術(shù)散低劑量組,孕三烯酮組及模型觀察組,同時(shí)設(shè)置正常大鼠在位內(nèi)膜為空白對(duì)照組。
2.分別給藥4周后,于末次給藥24小時(shí)內(nèi),腹腔麻醉大鼠,第三次剖腹,檢測(cè)移植物體積和重量,剝離種植的異位病灶及相應(yīng)的一段在位子宮內(nèi)膜制作標(biāo)本,進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察其病理組織形態(tài)。
3.免疫組織化學(xué)方法(SP法)測(cè)定CyclinE和P
3、27蛋白在大鼠復(fù)方莪術(shù)散組、孕三烯酮組、模型觀察組及空白對(duì)照組不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。
結(jié)果:
1.不檢測(cè)動(dòng)情期造模4周后,第二次剖腹證實(shí),采用自體移植法復(fù)制 EMs大鼠模型,其成模率為84.1%。生長(zhǎng)良好的異位病灶表現(xiàn):隆起的囊泡狀結(jié)構(gòu),內(nèi)部可見大量積液,豐富血管走行于病灶表面。病理學(xué)檢查:子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞、腺體和間質(zhì)組織生長(zhǎng)。
2.造模4周后,模型觀察組移植內(nèi)膜體積較大,腹腔粘連嚴(yán)重。復(fù)方莪術(shù)散(EZ
4、P)干預(yù)后體積明顯減小,腹腔粘連減輕。用藥前各組大鼠異位病灶體積比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);分組給藥4周后,第三次剖腹發(fā)現(xiàn)模型觀察組異位病灶體積較造模4周時(shí)明顯增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),EZP高劑量組異位病灶體積與模型觀察組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);EZP低劑量組異位病灶體積與模型觀察組相比,無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);孕三烯酮組異位病灶體積與模型觀察組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
5、;EZP高劑量組與孕三烯酮組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.分組給藥4周后,EZP高劑量組異位病灶重量與模型觀察組相比明顯減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與孕三烯酮組異位病灶重量比較,無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);EZP低劑量組異位病灶重量與模型觀察組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
4.從組織形態(tài)學(xué)來(lái)看,光鏡下觀察模型觀察組、EZP各劑量組及孕三烯酮組移植的子宮內(nèi)膜組織均成活,形成
6、的囊壁由內(nèi)向外分別為上皮層、粘膜層及少量纖維結(jié)締組織。模型觀察組異位內(nèi)膜上皮層呈高柱狀,粘膜層內(nèi)間質(zhì)致密,血管豐富,腺體數(shù)量較多,擴(kuò)張狀,腺腔大。相對(duì)于模型觀察組,各給藥組可見不同程度萎縮的異位內(nèi)膜組織,腺體面積縮小,數(shù)量減少??梢娮儽〉谋桓采掀?。可見低柱狀與扁平狀的上皮細(xì)胞,呈松散排列。間質(zhì)細(xì)胞明顯減少,血管數(shù)目減少。與正常大鼠子宮內(nèi)膜相比, EZP組在位內(nèi)膜的腺體數(shù)量、面積及腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)并無(wú)明顯改變。
5.免
7、疫組化技術(shù)檢測(cè)CyclinE蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞核上,在模型觀察組中異位、在位子宮內(nèi)膜及空白對(duì)照組子宮內(nèi)膜中均可檢測(cè)到 CyclinE蛋白表達(dá)。CyclinE在模型觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(88.9%)較其在空白對(duì)照組(在位子宮內(nèi)膜)中(10%)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CyclinE在EZP高劑量組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(22.2%)、在孕三烯酮組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(33.
8、3%)較其在模型觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(88.9%)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CyclinE在低劑量組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(60%)較其在模型觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(88.9%)降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
6.免疫組化技術(shù)檢測(cè) P27蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞核上,在模型對(duì)照組中異位、在位子宮內(nèi)膜及空白對(duì)照組子宮內(nèi)膜中均可檢測(cè)到P27蛋白表達(dá)。P27
9、在模型觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(22.2%)較其在空白對(duì)照組(在位子宮內(nèi)膜)中(80%)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);P27在 EZP高劑量組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(77.8%)、在孕三烯酮組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(77.8%)較其在模型觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(22.2%)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);P27在低劑量組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(40%)較其在模型
10、觀察組(異位子宮內(nèi)膜)中其陽(yáng)性表達(dá)率(22.2%)有所升高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
7.細(xì)胞周期素E與P27蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥組中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
結(jié)論:
1.復(fù)方莪術(shù)散可抑制大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展,減小移植物體積和重量。促進(jìn)異位病灶的萎縮吸收,減輕腹腔粘連,改善異位內(nèi)膜組織的病理變化,其中以復(fù)方莪術(shù)散高劑量組最為明顯,對(duì)在位內(nèi)膜組織無(wú)明顯影響。
2.大鼠異位內(nèi)膜
11、組織中CyclinE高表達(dá)與P27低表達(dá),與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,CyclinE和P27在異位內(nèi)膜組中表達(dá)呈負(fù)相關(guān),說(shuō)明兩者具有反向協(xié)同作用,表明單一的CyclinE高表達(dá)或者 P27低表達(dá),可能不足以導(dǎo)致內(nèi)異癥的發(fā)生,而需要兩者協(xié)同或者其他更多基因的共同作用。
3.復(fù)方莪術(shù)散能夠下調(diào)CyclinE在大鼠異位內(nèi)膜組織中的表達(dá),升高P27的表達(dá),調(diào)控細(xì)胞周期,使得異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖與存活受到限制從而使病灶萎縮。因此
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