放射性核素標(biāo)記Flt4抗體特異性定位前哨淋巴結(jié)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:該實(shí)驗(yàn)擬探索一種定位前哨淋巴結(jié)(sentinel lymph node,SLN)的新途徑,以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3(Flt4)是淋巴內(nèi)皮細(xì)胞比較特異的分子標(biāo)志物為依據(jù),采用放射性核素對(duì)Flt4的多克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記,通過(guò)探測(cè)γ射線探索其對(duì)SLN定位的可行性,期望利用受配體結(jié)合的免疫效應(yīng)進(jìn)行SLN的導(dǎo)向定位,旨在為舌癌SLN的準(zhǔn)確定位提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:1.采用氯胺-T法對(duì)Flt4PcAb進(jìn)行<'125>I標(biāo)記,并對(duì)標(biāo)記物行生物學(xué)性能

2、及安全性能的檢測(cè).2.應(yīng)用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行<'125>I-Flt4PcAb導(dǎo)向定位淋巴結(jié)的可行性分析及其代謝動(dòng)力學(xué)研究;檢測(cè)<'125>I-Flt4PcAb對(duì)荷Tca-8113移植瘤BALB/C裸小鼠的SLN的定位效果.3.應(yīng)用直接法對(duì)Flt4PcAb進(jìn)行<'99m>Tc的標(biāo)記,篩選最佳標(biāo)記條件;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)<'99m>Tc-F1t4PcAb導(dǎo)向定位淋巴結(jié)的可行性,并與<'125>I-F1t4PcAb的定位結(jié)果進(jìn)行對(duì)比研究.結(jié)果:1.氯胺-

3、T法標(biāo)記Flt4PcAb,平均標(biāo)記率為49.4﹪,分離純化后,平均放化純度達(dá)95.7﹪;標(biāo)記物體外穩(wěn)定性好且無(wú)菌無(wú)熱源.2.<'125>I-Flt4PcAb經(jīng)足背皮下注射30min后在膕窩淋巴結(jié)的ID(﹪)/g最高,血液位于其次,其它各組織器官均很小;膕窩淋巴結(jié)與血液ID(﹪)/g之間的比值在注射后16小時(shí)以?xún)?nèi)均大于1.5;<'125>I-Flt4PcAb經(jīng)皮下注射后在體內(nèi)的代謝可以進(jìn)行二室動(dòng)力學(xué)模型的擬合,吸收相半衰期(Tl/2ka)

4、為0.62±0.09d,消除相半衰期(Tl/2 β)為3.51±0.47d.3.BALB/C裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113細(xì)胞,移植瘤成功率達(dá)100﹪;檢測(cè)的70只荷瘤裸鼠患側(cè)的70枚膕窩淋巴結(jié)中,常規(guī)HE染色切片證實(shí)有3枚出現(xiàn)腫瘤微轉(zhuǎn)移灶(4.3﹪),角蛋白免疫組化染色顯示HE染色腫瘤轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的3枚淋巴結(jié)角蛋白染色均為陽(yáng)性,而HE染色腫瘤轉(zhuǎn)移陰性的67枚淋巴結(jié)中有2枚角蛋白染色陽(yáng)性,共計(jì)5枚出現(xiàn)腫瘤微轉(zhuǎn)移灶(7.1﹪);<'125

5、>I-Flt4PcAb攝取能力方面,腫瘤轉(zhuǎn)移陽(yáng)性淋巴結(jié)、反應(yīng)性增生淋巴結(jié)和正常淋巴結(jié)之間均有顯著差異,其中以轉(zhuǎn)移陽(yáng)性淋巴結(jié)最低,而正常淋巴結(jié)最高.4.直接法對(duì)Flt4PcAb進(jìn)行<'99m>Tc標(biāo)記,標(biāo)記率隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而升高,30min時(shí)基本趨于穩(wěn)定;提高反應(yīng)溫度有助于提高標(biāo)記率,但大于40℃以后標(biāo)記率升高不再明顯;隨還原劑Sncl2濃度的升高,標(biāo)記率隨之升高,當(dāng)Sncl2濃度大于0.875 μ g/ml之后標(biāo)記率趨于平穩(wěn);反應(yīng)體系

6、的PH值在5.5-9.5范圍內(nèi)時(shí),標(biāo)記率相對(duì)較高.<'99m>Tc-Flt4PcAb在24小時(shí)以?xún)?nèi)體外穩(wěn)定性良好.5.實(shí)驗(yàn)試劑經(jīng)足背皮下注射1h后,<'99m>Tc-Flt4PcAb組膕窩淋巴結(jié)的ID(﹪)/g高于空白對(duì)照組(P<0.01),而注射局部標(biāo)記物的殘留量低于空白對(duì)照組(P<0.05).與相同條件下125I-Flt4PcAb定位淋巴結(jié)的結(jié)果比較,<'99m>Tc-Flt4PcAb組膕窩淋巴結(jié)的ID(﹪)/g及注射局部的標(biāo)記物殘

7、留均偏低(P<0.01).結(jié)論:1.應(yīng)用氯胺-T法能夠?qū)lt4PcAb進(jìn)行1 25I的標(biāo)記,標(biāo)記物經(jīng)純化后可應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的體內(nèi)研究.2.<'125>I-Flt4PcAb能夠?qū)α馨徒Y(jié)進(jìn)行導(dǎo)向定位,其在SD大鼠體內(nèi)的代謝符合二室動(dòng)力學(xué)模型,并具有較長(zhǎng)的清除相半衰期.3.BALB/C裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113細(xì)胞懸液可成功致瘤,但局部浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較低;常規(guī)HE染色切片診斷為腫瘤轉(zhuǎn)移陰性的淋巴結(jié)中,仍有一定數(shù)量的微轉(zhuǎn)移灶發(fā)生,

8、采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)腫瘤微轉(zhuǎn)移灶具有更高的敏感性;應(yīng)用<'125>I-Flt4PcAb能夠檢測(cè)到荷Tca-8113移植瘤裸鼠的SLN,腫瘤轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的淋巴結(jié)較反應(yīng)性增生淋巴結(jié)以及正常淋巴結(jié)攝取<'125>I-Flt4PcAb的能力降低.4.直接法進(jìn)行Flt4PcAb的<'99m>Tc標(biāo)記比較適宜的標(biāo)記條件是反應(yīng)溫度為25℃、PH值為6.5、Sncl2濃度為0.875 μ g/ml、反應(yīng)時(shí)間為30min,標(biāo)記物體外穩(wěn)定性好,能夠滿足臨