穩(wěn)定性冠心病患者血清8-OHdG水平變化及其臨床意義.pdf

1、研究背景:
　　 冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病，coronary heart disease，CHD)是目前在全世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。動脈粥樣硬化是冠心病的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。氧化應(yīng)激在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。由于活性氧增多所致的氧化應(yīng)激促進(jìn)細(xì)胞損傷、增值、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮功能障礙以及低密度脂蛋白的氧化修飾，它被認(rèn)為是動脈粥樣硬化發(fā)生的基本病因。因此對體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)的監(jiān)測和

2、評估對于預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)冠心病有著重要的意義。
　　 由于活性氧具有不穩(wěn)定性和高度化學(xué)反應(yīng)性，直接檢測活性氧或氧化應(yīng)激水平非常困難。過多的活性氧會攻擊體內(nèi)的各種大分子物質(zhì)如DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，形成相應(yīng)的氧化產(chǎn)物。這些氧化損傷產(chǎn)物的檢測更具有可行性，因此這些物質(zhì)常用作評估氧化應(yīng)激狀態(tài)的生物標(biāo)志物。DNA組分之一的脫氧鳥苷在活性氧的作用下會變?yōu)?-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG)。

3、8-OHdG是主要的DNA氧化產(chǎn)物之一，目前已成為評估氧化應(yīng)激和DNA損傷常采用的生物標(biāo)志物。
　　 研究表明8-OHdG與動脈粥樣硬化存在一定關(guān)系，在人類動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)檢測到較高的8-OHdG含量，冠心病患者外周血淋巴細(xì)胞提取的DNA中8-OHdG水平升高，并且與冠脈狹窄的嚴(yán)重程度相關(guān)。另外研究表明氧化產(chǎn)生的8-OHdG在DNA修復(fù)酶系統(tǒng)作用下從DNA上切下，經(jīng)過血液循環(huán)后隨尿液排出，在血清中可以檢測出其含量?；谝陨涎芯?/p>

4、，我們推測血清8-OHdG水平可能在冠心病患者中升高并與冠脈狹窄嚴(yán)重程度有相關(guān)性，而目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道，因此本研究中擬闡明此問題。
　　 研究目的:
　　 本研究采用ELISA方法檢測穩(wěn)定性冠心病患者及對照組血清8-OHdG的濃度，并通過冠狀動脈造影對冠脈狹窄程度進(jìn)行評估，探討血清8-OHdG水平在冠心病患者中的變化情況以及血清8-OHdG與冠狀動脈狹窄嚴(yán)重程度的關(guān)系，以進(jìn)一步證明氧化應(yīng)激在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的

5、作用，明確血清8-OHdG對冠心病的預(yù)測價值。
　　 研究對象和方法:
　　 1.研究對象
　　 連續(xù)選取因懷疑患冠心病在中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院心內(nèi)科行冠狀動脈造影患者127例。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他心臟疾病：心臟瓣膜病，心肌病，嚴(yán)重充血性心力衰竭(NYHAⅢ級或Ⅳ級)，近期發(fā)生急性心肌梗死(＜6個月)，既往接受過PCI或CABG；年齡＞80歲；合并各種急慢性炎癥，自身免疫性疾病，肝腎功能不全，腫瘤等。所有病人均沒有

6、接受過抗氧化治療。
　　 2.研究方法
　　 2.1資料收集
　　 記錄每例患者的相關(guān)資料，如性別、年齡、體重等一般資料；冠心病各危險因素：高血壓，糖尿病，高血脂，吸煙；治療史；生化指標(biāo)及輔助檢查結(jié)果：TC，TG，HDL-C，LDL-C，hs-CRP，尿酸，肝、腎功能，心功能等檢查結(jié)果。
　　 2.2標(biāo)本的采集和血清8-OHdG檢測
　　 所有病人于入院第二天清晨空腹以無抗凝管抽取肘靜脈血3ml，

7、標(biāo)本在抽血后1h內(nèi)以3000rpm速度下離心20分鐘，分離上清液，在-80℃冰箱保存。
　　 血清8-OHdG濃度測定采用日本防老化研究所生產(chǎn)的高敏感性8-OHdGELISA試劑盒，檢測范圍為0.125-10 ng/ml。因為血清中的大分子物質(zhì)會對檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾，因此檢測之前需對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，使用離心超濾器過濾掉分子量大于10KD的物質(zhì)后進(jìn)行檢測。
　　 2.3冠狀動脈造影
　　 冠狀動脈直徑狹窄≥50％判斷

8、為陽性，歸入冠心病組，冠脈造影正常者為對照組。排除冠脈中度狹窄(＜50％)的患者。在冠心病組中根據(jù)狹窄累及的血管支數(shù)分為單支、雙支、和三支病變組。左主干病變者歸為為雙支病組。此外，按Gensini積分系統(tǒng)對冠脈狹窄程度進(jìn)一步評估。
　　 2.4統(tǒng)計學(xué)分析
　　 因血清8-OHdG濃度成偏態(tài)分布，經(jīng)對數(shù)(Log10)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布。連續(xù)變量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)或中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示，分類變量以百分?jǐn)?shù)表示，兩組

9、間比較選用獨立樣本t檢驗、u檢驗或x2檢驗。多組間比較采用單因素方差分析。兩變量間的相關(guān)性采用Pearson或Spearman相關(guān)分析。應(yīng)用多因素Logistic回歸分析篩選患冠心病的獨立危險因素。所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.冠心病組與對照組之間一般臨床資料及血清8-OHdG濃度的比較
　　 在127例患者中，冠心病組74例，對照組5

10、3例。與對照組相比，冠心病組患者的平均年齡較大(P＜0.001)，男性比例較高(P＜0.05)。高血壓、高血脂、糖尿病患者在冠心病組出現(xiàn)比例較高(P＜0.05)。冠心病組hs-CRP較高(P＜0.05)，其他參數(shù)兩組間比較無明顯差異。
　　 冠心病組血清8-OHdG或Log(8-OHdG)水平較對照組明顯升高(0.41[0.30-0.57]ng/ml vs0.32[0.25-0.43]ng/ml，或-0.37±0.22 vs-0

11、.50±0.18，P=0.001).
　　 2.8-OHdG濃度與冠脈狹窄嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析
　　 在冠心病組中根據(jù)冠脈病變支數(shù)分為三組：單支病變組(n=35)，雙支病變組(n=18)，三支病變組(n=21)，這三個亞組Log(8-OHdG)分別為-0.40±0.20，-0.38±0.19，-0.30±0.25。單因素方差分析顯示，隨著病變支數(shù)的增加，Log(8-OHdG)水平逐漸升高(P=0.002)。并且Log(8

12、-OHdG)水平與Gensini積分呈明顯正相關(guān)(r=0.379，P=0.001)。
　　 3.冠心病患病的獨立危險因素分析
　　 以是否有冠心病為因變量，以性別、吸煙、高血壓、高血脂、糖尿病、年齡和8-OHdG為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果在校正其他影響因素后，本回歸模型中的8-OHdG、年齡、糖尿病、高血脂為冠心病的獨立危險因素，其中8-OHdG的OR值為1.318(95％CI:1.032-1.68