nm23-H1抑制乳腺癌機(jī)理的研究.pdf

1、　　目的：探討nm23—H1基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞的抑制作用及機(jī)理,為nm23—H1的基因治療提供依據(jù)。
　　方法：利用人nm23—H1基因與真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)構(gòu)建成重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-NMH1后,分別以pcDNA3.1-NMH1合并脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)化人乳腺癌MCF-7S細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮ECV-304細(xì)胞；經(jīng)G418篩選出nm23-H1穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株后,檢測(cè)nm23-H1對(duì)乳腺癌MCF-7S細(xì)胞及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

2、ECV-304細(xì)胞增殖能力、克隆形成率、移動(dòng)能力的影響；同時(shí),用RT-PCR驗(yàn)證人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)ECV-304的nm23—H1基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,并通過(guò)透射電子顯微鏡與免疫組織化學(xué)的方法分別檢測(cè)、探究nm23—H1及nm23-H1/NDPK-A對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304的作用部位,從而進(jìn)一步探討nm23—H1基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞的抑制作用機(jī)理。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)入nm23-H1基因的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7S和人臍靜脈內(nèi)皮

3、細(xì)胞ECV-304的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期延長(zhǎng),細(xì)胞增殖速度減慢,移動(dòng)距離縮短,克隆形成率降低；并且,nm23—H1在細(xì)胞ECV-304中轉(zhuǎn)錄水平有表達(dá),同時(shí)nm23—H1所表達(dá)的蛋白NDPK-A主要在胞漿；而且,轉(zhuǎn)染nm23—H1后的ECV-304細(xì)胞呈現(xiàn)線粒體數(shù)量減少、腫脹、固縮、嵴變形甚至消失。
　　結(jié)論：nm23—H1基因抑制乳腺癌的機(jī)制與其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖能力、克隆形成率以及移動(dòng)能力的抑制密切相關(guān)；這又與其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移