大鼠正中隆起Nestin,Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的:觀察正中隆起的Nestin，Sox2，BudU陽(yáng)性細(xì)胞的分布及形態(tài)。
　　 方法:選擇健康SD大鼠30只，體重180-200g，隨機(jī)分成兩組:①正常組(n=15);②模型組(n=15):注射BrdU。
　　 1.BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備:分別于16:00和18:00，按照50mg/kg劑量對(duì)模型組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射BrdU生理鹽水溶液，連續(xù)給藥三天，制備BrdU模型。
　　 2.取材和標(biāo)本制備:正常

2、組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只，常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，后固定，浸蠟包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片，厚度為5μm，分別經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色、Nestin和Sox2免疫組織化學(xué)染色;BrdU模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9只，常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，浸蠟包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片，厚度為5μm，進(jìn)行BrdU免疫組織化學(xué)染色，封片后OlympusBX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。
　　 3.Nestin，Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色步驟:正常組實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物6只，常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，后固定，蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分，冰凍切片，厚度為8μm，經(jīng)Nestin，Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色，50％甘油封片后OlympusBX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。
　　 4.BrdU，Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色:BrdU模型動(dòng)物6只，常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，后固定，蔗糖浸泡后選取含正中隆起部分，冰凍切片，厚度為8μm，經(jīng)BrdU，Sox2免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)染色，50％甘油封片后Oly

4、mpusBX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:照片的陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-ProPlus6.0對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞和總細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率。
　　 結(jié)果:
　　 1.甲苯胺藍(lán)染色
　　 正常組大鼠下丘腦的冠狀切片顯示正中隆起位于第三腦室的基底部。甲苯胺藍(lán)染色后，細(xì)胞核呈藍(lán)色，尼氏體呈藍(lán)紫色，正中隆起被分為五個(gè)層次:室管膜層、室管膜下層、纖維層、網(wǎng)狀層和柵狀層。正中隆起及第三

5、腦室側(cè)壁的室管膜細(xì)胞分為四種不同形態(tài)。正中隆起的腹側(cè)被腺垂體結(jié)節(jié)部覆蓋，ME含有大量毛細(xì)血管。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色
　　 2.1.Nestin染色:ME中央部2/3的室管膜層和室管膜下層，胞核較大，胞質(zhì)為Nestin強(qiáng)陽(yáng)性;ME兩側(cè)的室管膜層和室管膜下層，胞核較小，胞質(zhì)為Nestin弱陽(yáng)性;ME纖維層和網(wǎng)狀層有散在分布的粗大Nestin陽(yáng)性突起，Nestin陽(yáng)性細(xì)胞胞核較大，散在分布;在柵狀層偶見(jiàn)Nestin陽(yáng)性

6、細(xì)胞，胞核較大。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Nestin陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:6.01±5.30％。ME的Nestin陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:42.45±3.42％。
　　 2.2.Sox2染色:ME室管膜層和室管膜下層的Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞緊密排列，ME纖維層和網(wǎng)狀層，Sox2陽(yáng)性細(xì)胞較稀疏。第三腦室單側(cè)側(cè)壁Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:32.77±7.24％。ME的Sox2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:48.30±5.66％。
　　 2.3.BrdU染色:Brd

7、U陽(yáng)性細(xì)胞在ME的纖維層和網(wǎng)狀層零星分布，少數(shù)位于柵狀層，偶見(jiàn)于室管膜下層。第三腦室單側(cè)側(cè)壁BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:0.12±0.08％。ME的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:4.17±0.38％。
　　 3.免疫熒光化學(xué)染色
　　 3.1.Nestin，Sox2雙標(biāo)免疫熒光化學(xué)染色:Nestin陽(yáng)性胞漿呈綠色熒光，Sox2陽(yáng)性胞核呈紅色熒光。Nestin和Sox2雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞在ME中央部2/3的室管膜層和室管膜下層密集分布，在

8、ME纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏。
　　 3.2.BrdU，Sox2雙標(biāo)免疫熒光化學(xué)染色:BrdU陽(yáng)性胞核呈綠色熒光，Sox2陽(yáng)性胞核呈紅色熒光。BrdU和Sox2雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核顏色疊加成為黃綠色，在ME纖維層和網(wǎng)狀層零星分布，少數(shù)位于柵狀層，偶見(jiàn)于室管膜下層。
　　 結(jié)論:
　　 1.Nestin陽(yáng)性細(xì)胞，在ME的室管膜層和室管膜下層分布密集，在纖維層和網(wǎng)狀層分布稀疏。
　　 2.Sox2陽(yáng)性細(xì)胞，在M