Sox2、BrdU及Nestin陽(yáng)性細(xì)胞在穹窿下器內(nèi)分布情況及形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：觀察穹窿下器中神經(jīng)干細(xì)胞的分布及形態(tài)。
　　方法：⑴制備BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型：按照體重50mg/Kg對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射BrdU生理鹽水注射液。分別于14:00和16:00給藥，連續(xù)給藥三天，制備BrdU模型。⑵免疫組織化學(xué)染色：正常動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，浸蠟包埋，選取含穹窿下器部分，石蠟切片，厚度為5um，分別經(jīng)Nestin和Sox2免疫組織化學(xué)染色，封片后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。

2、⑶Nestin、Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色步驟：正常動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后選含穹窿下器部分，冰凍切片，厚度為10um，經(jīng)Nestin、SOX2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色，甘油封固后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。⑷BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫組織化學(xué)染色：BrdU模型動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，浸蠟包埋，選取含穹窿下器部分，石蠟切片，厚度為5um，經(jīng)BrdU免疫組織化學(xué)染色，封片后Oly

3、mpus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。⑸BrdU模型動(dòng)物經(jīng)BrdU，Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色：模型動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后選含穹窿下器部分，冰凍切片，厚度為10um，經(jīng)BrdU、Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色，甘油封固后Olympus BX-UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。⑹統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測(cè)定平均光密度值。用spss13.0軟件進(jìn)行分析。采用S

4、NK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為有顯著性差異。
　　結(jié)果：①鏡下，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后，可以看到SFO內(nèi)有豐富的毛細(xì)血管分布，兩外側(cè)區(qū)有一些較大的血管，血管周圍的組織排列較緊密，核心區(qū)域是微血管。室管膜細(xì)胞呈單層排列，細(xì)胞形態(tài)呈梭形，細(xì)胞表面光滑，細(xì)胞核大小不等，呈橢圓形或圓形。SFO內(nèi)的細(xì)胞分布并不均勻，在大血管周圍，SFO的外周區(qū)以及第三腦室的室管膜層，以上部位的細(xì)胞為大細(xì)胞，胞體較豐滿，染色比較均勻，但突起并不明顯，細(xì)胞核呈橢圓形

5、或圓形。其余部位的細(xì)胞一般較小，主要分布于SFO中心區(qū)的小血管四周。在SFO中心區(qū)分散了一些體積較大的細(xì)胞。血管間隙內(nèi)可見(jiàn)胞漿內(nèi)含有微小氣泡的神經(jīng)內(nèi)分泌樣細(xì)胞，此種細(xì)胞胞體較豐滿，突起較少，且長(zhǎng)度較短。②在SFO的冠狀面上可以看到SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞排列緊密，胞核為中等大小，呈圓形或橢圓形，中間部較兩側(cè)邊緣部SOX2陽(yáng)性細(xì)胞多，SFO內(nèi)血管周圍的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞較少，室管膜處可見(jiàn)單層排列的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞，而與SFO相連的海馬腹

6、側(cè)聯(lián)合內(nèi)，只有少量的陽(yáng)性細(xì)胞，側(cè)腦室室管膜的陽(yáng)性細(xì)胞呈單層緊密排列。脈絡(luò)叢未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。SFO兩側(cè)部SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0.3783±0.0251，中間部SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0.5177±0.0352。海馬腹側(cè)聯(lián)合SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0.2185±0.0473。SFO兩側(cè)部與中間部比較結(jié)果顯示有顯著性差異(P<0.05)，SFO與海馬腹側(cè)聯(lián)合比較結(jié)果顯示有顯著性差異(P<0.05)。③SF

7、O內(nèi)Nestin陽(yáng)性細(xì)胞呈不均勻分布，主要分布于大血管周圍，SFO的外周區(qū)以及第三腦室的室管膜層，血管周圍可見(jiàn)圍繞血管的陽(yáng)性表達(dá)。側(cè)腦室的室管膜內(nèi)可見(jiàn)單層緊密排列的陽(yáng)性細(xì)胞。脈絡(luò)叢內(nèi)也可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。SFO相連的海馬腹側(cè)聯(lián)合內(nèi)，未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。SFO兩側(cè)部比中間部陽(yáng)性細(xì)胞多。SFO兩側(cè)部Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0.3745±0.0553，中間部Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0.2145±0.0241。SFO兩側(cè)部與

8、中間部比較結(jié)果顯示有顯著性差異(P<0.05)。④冠狀切面上SFO內(nèi)可見(jiàn)散在的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞，由于數(shù)量較少，所有分布位置不恒定。⑤BrdU、SOX2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)結(jié)果觀察：SFO內(nèi)可見(jiàn)SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞排列緊密，胞核中等大小，呈圓形或橢圓形，SOX2陽(yáng)性細(xì)胞分布廣泛，遍布整個(gè)SFO，但中間部較兩側(cè)邊緣部SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞多，而SFO內(nèi)血管周圍的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞較少，室管膜處可見(jiàn)單層排列較整齊的SOX2免疫陽(yáng)性

9、細(xì)胞。BrdU免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞的較少，有少量細(xì)胞同時(shí)存在兩種陽(yáng)性表達(dá)。⑥Nestin、SOX2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)結(jié)果觀察：SFO內(nèi)Nestin免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞分布不均勻，主要分布于大血管周圍，SFO的外周區(qū)以及第三腦室的室管膜層。SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞分布廣泛，遍布整個(gè)SFO，但中間部與兩側(cè)邊緣部相比，SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞多，SFO內(nèi)血管周圍的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞較少，室管膜處可見(jiàn)單層排列較整齊的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞。根據(jù)Nes