一種新的白細(xì)胞分化抗原CD226（PTA1）分子結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系的研究.pdf

1、我們采用親和層析法,從血小板表面純化了天然CD226分子,純化的蛋白分子保持了較好的免疫反應(yīng)性,以此為免疫原制備的抗CD226分子的多克隆抗體效價(jià)達(dá)4×10<'-5>.經(jīng)Western blot鑒定,多抗識(shí)別純化分子的分子量為67kDa.以純化的CD226分子為免疫原,免疫Balb/c小鼠,制備了7株分泌抗CD226分子的單克隆抗體雜交瘤MFU1-7,多次傳代和長(zhǎng)期培養(yǎng)可穩(wěn)定分泌單克隆抗體,腹水效價(jià)一般在10<'-6>-10<'-7>.

2、在間接ELISA實(shí)驗(yàn)中,與天然CD226分子和PTA1/Ig均有良好的反應(yīng)性,與hIgG無(wú)交叉反應(yīng).所有抗體可結(jié)合COS7細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的CD226分子.采用生物傳感器單抗配對(duì)方式表位分析（pairwise testing of epitope mapping）的方法,發(fā)現(xiàn)FMU1-7、Leo A1和New E1可分別識(shí)別CD226分子7個(gè)不同的表位.建立了Leo A1與抗CD226 PoAb雙抗體夾心ELISA方法,首次發(fā)現(xiàn)人活化外周血

3、單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清中和人血清中存在可溶性CD226分子（sCD226）,正常人血清中sCD226水平為36.23±4.51μg/L,腫瘤和一些發(fā)生移植排斥反應(yīng)等臨床疾病患者血清中sCD226水平升高,肺癌、賁門(mén)癌、腦膜瘤、腎腫瘤及睪丸腫瘤等患者血清sCD226為57.26±5.00μg/L,從而表明血清中sCD226水平的升高與一些臨床疾病有關(guān).通過(guò)構(gòu)建PTA1分子胞膜外區(qū)不同結(jié)構(gòu)域截?cái)嗤蛔凅w真核表達(dá)載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞,間接免疫