一種新的白細胞分化抗原CD226（PTA1）分子結(jié)構(gòu)和功能關系的研究.pdf

1、我們采用親和層析法,從血小板表面純化了天然CD226分子,純化的蛋白分子保持了較好的免疫反應性,以此為免疫原制備的抗CD226分子的多克隆抗體效價達4×10<'-5>.經(jīng)Western blot鑒定,多抗識別純化分子的分子量為67kDa.以純化的CD226分子為免疫原,免疫Balb/c小鼠,制備了7株分泌抗CD226分子的單克隆抗體雜交瘤MFU1-7,多次傳代和長期培養(yǎng)可穩(wěn)定分泌單克隆抗體,腹水效價一般在10<'-6>-10<'-7>.

2、在間接ELISA實驗中,與天然CD226分子和PTA1/Ig均有良好的反應性,與hIgG無交叉反應.所有抗體可結(jié)合COS7細胞瞬時轉(zhuǎn)染的CD226分子.采用生物傳感器單抗配對方式表位分析（pairwise testing of epitope mapping）的方法,發(fā)現(xiàn)FMU1-7、Leo A1和New E1可分別識別CD226分子7個不同的表位.建立了Leo A1與抗CD226 PoAb雙抗體夾心ELISA方法,首次發(fā)現(xiàn)人活化外周血

3、單個核細胞培養(yǎng)上清中和人血清中存在可溶性CD226分子（sCD226）,正常人血清中sCD226水平為36.23±4.51μg/L,腫瘤和一些發(fā)生移植排斥反應等臨床疾病患者血清中sCD226水平升高,肺癌、賁門癌、腦膜瘤、腎腫瘤及睪丸腫瘤等患者血清sCD226為57.26±5.00μg/L,從而表明血清中sCD226水平的升高與一些臨床疾病有關.通過構(gòu)建PTA1分子胞膜外區(qū)不同結(jié)構(gòu)域截斷突變體真核表達載體,瞬時轉(zhuǎn)染COS7細胞,間接免疫