CD226分子與臨床疾病的關(guān)系及其分子機(jī)制.pdf

1、1985年，澳大利亞學(xué)者 Burns G教授以混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(Mixed Lymphocyte Culture,MLC)中活化的淋巴細(xì)胞作為免疫原免疫小鼠制備抗活化T細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)，篩選得到一株可特異性識(shí)別表達(dá)于活化T細(xì)胞表面膜分子的mAb，將其命名為L(zhǎng)eoA1。隨后，發(fā)現(xiàn)LeoA1 mAb識(shí)別的分子亦高水平表達(dá)在血小板表面，遂將此分子命名為血小板與T細(xì)胞活化抗原1(plat

2、elet and T cell activation antigen1，PTA1)。在2000年第七屆國(guó)際人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組(HLDA7)大會(huì)上，由我室提交的抗PTA1 mAb和由DNAX研究所提交的抗DNAM-1 mAb獲準(zhǔn)了新的CD編號(hào)-CD226，這是首次以我國(guó)實(shí)驗(yàn)室為主要研究單位獲得的新CD分子命名。
　　CD226分子屬于免疫球蛋白超家族成員，胞膜外區(qū)含有2個(gè)V樣結(jié)構(gòu)域，分子量約為65kD，主要表達(dá)于T細(xì)胞、NK細(xì)

3、胞、NKT細(xì)胞、巨核/血小板譜系、血管內(nèi)皮細(xì)胞、B細(xì)胞亞群和部分造血干細(xì)胞。2003年，人CD226分子的兩種配體鑒定成功，分別是人脊髓灰質(zhì)炎病毒受體(PVR/CD155)和 CD112。CD226分子與其配體的相互作用參與T細(xì)胞的分化和活化、NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的殺傷、單核/巨噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附、巨噬細(xì)胞的分化和血小板的活化與聚集等，與自身免疫性疾病、移植物抗宿主反應(yīng)以及病毒感染等疾病關(guān)系密切。
　　我們前期實(shí)驗(yàn)

4、發(fā)現(xiàn)，CD226 mAb LeoA1能夠調(diào)控人MLC培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的表達(dá)。由于MLC體系是一個(gè)多細(xì)胞培養(yǎng)體系，而IL-10是一個(gè)可以由多種免疫細(xì)胞合成和分泌的抑制性細(xì)胞因子(如參與固有免疫應(yīng)答的樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和NK細(xì)胞；參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的Th1、Th2、Th17、Treg、CD8+T細(xì)胞和B細(xì)胞)，因此搞清CD226分子影響MLC體系中IL-10分泌的細(xì)胞機(jī)制十分必要；另一方面，作為具有重要免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，

5、IL-10在機(jī)體免疫應(yīng)答的各階段以及多個(gè)部位調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答強(qiáng)度，進(jìn)而參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，因此進(jìn)一步觀測(cè)CD226分子和IL-10在臨床疾病中的作用及其機(jī)制有助于深入理解CD226分子的功能。鑒于此，本課題圍繞CD226分子展開研究，獲得了以下的研究結(jié)果：
　　(1)在本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)CD226 mAb LeoA1可以調(diào)控MLC體系中細(xì)胞因子分泌格局的基礎(chǔ)上，我們觀測(cè)了LeoA1在MLC體系中上調(diào)IL-10表達(dá)的細(xì)胞機(jī)制，

6、發(fā)現(xiàn)LeoA1作用于MLC體系24 h時(shí)，CD4+IL-10+T細(xì)胞的比例與對(duì)照組相比顯著升高，而CD14+IL-10+細(xì)胞、CD19+IL-10+細(xì)胞、CD56+CD16+IL-10+細(xì)胞、CD11c+HLA-DR+IL-10+細(xì)胞與對(duì)照組相比無顯著性差異，提示 LeoA1促進(jìn)CD4+IL-10+T細(xì)胞的分化；進(jìn)一步分別去除PBMC中的單核細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞或B細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)分別去除單核細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞后，MLC體系中IL-10

7、的表達(dá)水平顯著降低，提示單核細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞參與LeoA1促進(jìn)MLC體系中IL-10的分泌。
　　(2)在應(yīng)用WT小鼠和Cd226-/-小鼠成功建立小鼠EAE模型的基礎(chǔ)上，我們發(fā)現(xiàn)Cd226-/-小鼠EAE發(fā)病時(shí)間比 WT小鼠延遲且EAE嚴(yán)重程度減弱；腰髓組織HE染色結(jié)果顯示，Cd226-/-小鼠在EAE發(fā)病高峰期時(shí)腰髓組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)減少；ELISA檢測(cè)血清中細(xì)胞因子水平時(shí)，發(fā)現(xiàn)Cd226-/-小鼠在EAE發(fā)病高峰期體內(nèi)

8、血清中IL-10表達(dá)水平較WT小鼠高。
　　(3)在收集了120名肺癌患者和83名健康志愿者的外周血標(biāo)本基礎(chǔ)上，我們通過提取全基因組DNA并運(yùn)用PCR-RFLP方法結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析研究人群中CD226單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)Gly307Ser(rs763361)與肺癌易感性的關(guān)聯(lián)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在非吸煙組人群中，肺癌人群中TT基因型的比例顯著高于健康對(duì)照組，OR值為3.4846，95％CI為1.1932-10.1762，P值為0.0224。女性