中醫(yī)不同體質(zhì)類型與HLA-II類基因相關(guān)性研究.pdf

1、該文對中醫(yī)體質(zhì)學說的七種不同體質(zhì)類型進行了HLA-Ⅱ類基因多態(tài)性分布研究,首先按照中醫(yī)四診合參原則,制訂體質(zhì)調(diào)查表,然后在廣東漢族人群中隨機選擇一般體檢無陽性病變?nèi)巳鹤鳛閷嶒瀸ο?各體質(zhì)類型收入100余例,應(yīng)用PCR-SBT方法進行HLA-DPB1,HLA-DRB1,HLA-DQB1的基因擴增與分型,根據(jù)得到的不同體質(zhì)類型的不同基因分型數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析.結(jié)果顯示,DPB1與中醫(yī)體質(zhì)關(guān)聯(lián)很小,而DR、DQ與之關(guān)聯(lián)較大.綜合來說,陰虛質(zhì)與

2、DPB1*0501、DPB1*02012、DRB1*13021、DQB1*06011-06013、DQB1*03032、DQB1*06041、DQB1*0609關(guān)聯(lián);氣虛質(zhì)與DRB1*11011、DQB1*03032、DQB1*06041關(guān)聯(lián);濕熱質(zhì)與DRB1*11011、DRB1*13021、DQB1*06041、DQB1*0609、DQB1*05011關(guān)聯(lián);陽虛質(zhì)與DRB1*11011、DRB1*13021、DQB1*06041關(guān)聯(lián)

3、;瘀血質(zhì)與DRB1*15011、DRB1*04051、DRB1*1405、DRB1*14071、DQB1*05021、DQB1*03032關(guān)聯(lián);痰濕質(zhì)與DRB1*09012、DRB1*11011、DQB1*03032、DQB1*05011關(guān)聯(lián).在對樣品DPB1測序分型的過程中,我們發(fā)現(xiàn)DPB1不明確雜合子的問題非常嚴重,直接影響到結(jié)果的分型統(tǒng)計.在946例樣品中,結(jié)果呈不明確雜合子的總共353例,共計30種類型,占樣品總數(shù)比率高達37％

4、.為了快速而有效的解決這個問題,該文設(shè)計出一套SSP分型解決方案.該方法采用6條上游引物與15條下游引物,使用同一套擴增體系與兩套循環(huán)反應(yīng)條件,只需一次PCR擴增,就可以很方便快捷的準確分辨出樣品的基因型.另外在這些樣品中,有3個樣品的測序結(jié)果,與現(xiàn)有的多態(tài)性數(shù)據(jù)庫無法匹配.經(jīng)過克隆驗證,它們是未曾發(fā)現(xiàn)過的新HLA等位基因.這3個基因前兩個已經(jīng)向WHO命名委員會提交并獲得命名,分別為HLA-DRB1*0449,HLA-DPB1*0102

5、,第三個已向GeneBank提交,獲得注冊號AY619719,基因命名正在申請中.與HLA-DRB1*0449最相近的是HLA-DRB1*0406.兩者堿基序列幾乎完全相同,只是HLA-DRB1*0449第二外顯子第18位堿基由G變?yōu)锳.它導致了成熟蛋白分子DR β鏈11位氨基酸殘基由V(Val,頡氨酸)變成Ⅰ(Ile,異亮氨酸).而DPB1*0202與DPB1*0102最為相似,只有一個堿基的區(qū)別(第二外顯子192位由G替換成A).這