子宮內(nèi)膜異位癥中miR-155調(diào)控Meis1的表達(dá).pdf

1、目的：研究MicroRNAs在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況，探索可直接靶向于Meis13’UTR區(qū)并且調(diào)控其表達(dá)的miRNAs，及其對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　方法：運(yùn)用qRT-PCR法檢測(cè)預(yù)測(cè)的可能靶向于Meis13’UTR區(qū)的miRNAs在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜（35例）及正常子宮內(nèi)膜（35例）中的表達(dá)情況，挑選出后續(xù)用于靶向驗(yàn)證的miRNA；通過400目濾網(wǎng)分離得到子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞；

2、用Lipo2000將miR-155模擬物、抑制劑和無關(guān)序列轉(zhuǎn)染到子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中并將其分為三組：miR-155 mimics組、miR-155 inhibitor組及Negative control組，分別運(yùn)用qRT-PCR及Western Blotting檢測(cè)Meis1 mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)變化；構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告分析載體psi-CHECK2-Meis13’UTR及定向點(diǎn)突變載體psi-CHECK2-Meis13’UTR-m

3、u檢測(cè)miR-155對(duì)Meis13’UTR區(qū)的直接靶向調(diào)控作用；運(yùn)用CCK8法檢測(cè)各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖的變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：（1）qRT-PCR結(jié)果顯示，miRNAs在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)存在差異，miR-21, miR23a, miR23b, miR145于EMs異位內(nèi)膜中的表達(dá)水平低于在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)（P<0.05）,miR-155于EMs異位內(nèi)膜中的表達(dá)水平明顯高于在正常子宮

4、內(nèi)膜中的表達(dá)（P<0.05）。（2）miR-155在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控Meis1的表達(dá)。（3）miR-155通過直接靶向于Meis1的3’UTR區(qū)來發(fā)揮調(diào)控作用。（4）上調(diào)miR-155可促進(jìn)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖，抑制其凋亡；而下調(diào)miR-155則抑制子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡（P＜0.05）。
　　結(jié)論：miRNAs參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病,miR-155通過直接靶向于Meis1的3’UTR區(qū)在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控Meis1的表達(dá)