天然化合物維康醇通過活性氧依賴途徑誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:
　　對于去勢抵抗性前列腺癌目前尚無有效的治療手段,亟待開發(fā)一種新型的化療藥物。本研究主要通過體外實驗來評估新型天然化合物維康醇對于惡性前列腺細(xì)胞的抗腫瘤作用,并進(jìn)一步探討其藥物作用機(jī)制。
　　材料與方法:
　　通過蛋白免疫印跡及流式細(xì)胞計數(shù)等實驗方法評估維康醇在不同前列腺癌細(xì)胞系及正常前列腺上皮誘導(dǎo)凋亡的作用,然后通過反應(yīng)活性氧(Reactiveoxygen species,ROS)熒光染料檢測三株具有代表性的

2、細(xì)胞系PC3,DU145,BPH1添加不同種類ROS清除劑后細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化,探討其作用途徑。最后為了證明維康醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是Bax蛋白依賴性的,我們通過對PC3細(xì)胞系進(jìn)行RNA干擾及外源性導(dǎo)入Bax蛋白天然缺失的細(xì)胞系DU145,評估維康醇處理細(xì)胞后的凋亡指標(biāo)。最后通過透射電鏡及應(yīng)用不同種類Caspase蛋白酶抑制劑探討了Bax蛋白可能的下游途徑。
　　結(jié)果:
　　通過對凋亡標(biāo)志物的檢測,如Caspase-3及PA

3、RP確認(rèn)了維康醇誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式為凋亡。ROS熒光染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)維康醇誘導(dǎo)了前列腺癌細(xì)胞內(nèi)廣泛的氧化應(yīng)激并活化凋亡途徑最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。然而,維康醇誘導(dǎo)的這種細(xì)胞凋亡可被ROS清除劑N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)及二氫硫辛酸(DHLA)完全阻斷。我們同時證明了Bax蛋白在維康醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中激活并發(fā)揮著重要的作用,維康醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡均伴有Bax蛋白的激活。對于Bax缺失的前列腺癌細(xì)胞系DU145在外源性導(dǎo)入Bax質(zhì)粒后,其對維康醇