靜脈輸注凋亡細(xì)胞對異種心臟移植免疫排斥反應(yīng)的作用研究.pdf

1、目的：通過建立豚鼠到大鼠腹腔心臟移植模型，采用靜脈輸注豚鼠凋亡細(xì)胞的方法預(yù)處理受體，研究凋亡細(xì)胞對異種心臟移植免疫排斥反應(yīng)的影響，探討異種心臟移植免疫耐受的機(jī)制。 方法：CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測：取豚鼠脾細(xì)胞，分四組，分別為A組(空白組)，B組(豚鼠正常脾細(xì)胞)，C組(豚鼠死脾細(xì)胞)，D組(豚鼠凋亡脾細(xì)胞)經(jīng)后肢靜脈輸注入SD大鼠，每組5只，輸注后檢測CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的時間點(diǎn)為輸注后0天、3天、7天、11

2、天、15天，篩選CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞體內(nèi)濃度最高值時的天數(shù)為心臟移植時間點(diǎn)。移植前檢測SD大鼠體內(nèi)白介素10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)濃度。供受體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)：以SD大鼠的淋巴細(xì)胞作為MLR的反應(yīng)細(xì)胞，豚鼠脾細(xì)胞(正常細(xì)胞、死細(xì)胞、凋亡細(xì)胞)作為MLR刺激細(xì)胞，混合培養(yǎng)后檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖情況。 心臟移植：供體豚鼠和受體SD大鼠各25只隨機(jī)分成五組，I組(空白組)：未做處理，直接行豚

3、鼠到大鼠心臟移植。II組(CVF組)：術(shù)前24小時受體腹腔注射中華眼鏡蛇毒因子(CVF)40u/kg，手術(shù)前下腔靜脈注射CVF 60u/kg。Ⅲ組(CVF+豚鼠正常脾淋巴細(xì)胞)：術(shù)前一周輸注豚鼠正常脾淋巴細(xì)胞，心臟移植術(shù)前24小時腹腔注射CVF40U/kg，行大鼠腹部異種異位豚鼠心臟移植，術(shù)中靜脈注射CVF 60U/kg;Ⅳ組(CVF+豚鼠脾壞死淋巴細(xì)胞)：術(shù)前一周輸注豚鼠脾壞死淋巴細(xì)胞，心臟移植術(shù)前24小時腹腔注射CVF 40U/kg

4、，行大鼠腹部異種異位豚鼠心臟移植，術(shù)中靜脈注射CVF 60U/kg；V組(CVF+豚鼠凋亡脾淋巴細(xì)胞)：術(shù)前一周輸注豚鼠凋亡脾淋巴細(xì)胞，心臟移植術(shù)前24小時腹腔注射CVF 40U/kg，術(shù)中靜脈注射CVF 60U/kg；觀測指標(biāo)：移植心臟的存活時間、組織病理學(xué)改變。 結(jié)果：(1)凋亡脾淋巴細(xì)胞大鼠外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量第三天即開始升高，至第七天達(dá)到最高值，至第十五天又降至正常水平。(2)供受體異種混合淋巴細(xì)胞反

5、應(yīng)(MLR)，刺激效應(yīng)分別為：凋亡細(xì)胞組：380.1±10.10，正常細(xì)胞組：590.0±12.71，壞死細(xì)胞組：615.7±49.52，凋亡細(xì)胞輸注組明顯低于正常細(xì)胞組和壞死細(xì)胞組，P<0.05；正常細(xì)胞組和壞死細(xì)胞組刺激效應(yīng)無明顯差異，P>0.05。(3)IL-10、TGF-β1，Ⅰ組、Ⅲ組和Ⅳ組OD值及濃度值之間無顯著差異，P>0.05；V組與Ⅰ組、Ⅲ組和Ⅳ組相比，OD值及濃度值有明顯差異，P<0.05。(4)供心平均存活時間(M

6、ST)：Ⅰ組28.0±14.20分鐘，Ⅱ組325.60±50.69分鐘，Ⅲ組360.8±42.47分鐘，Ⅳ組317.0±33.54分鐘，V組444.20±31.05分鐘。V組與Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組組間比較P>0.05。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組平均存活時間延長較I組明顯延長P<0.05，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組組間相比較無明顯差異，P>0.05。 結(jié)論：1、靜脈輸注豚鼠凋亡細(xì)胞的方法，可以提高體內(nèi)HL-10、TGF-β1水平，從而延長移植物存活時間。2、采用靜脈