骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在抗異種免疫排斥中作用的初步探討.pdf

1、目的：通過采用混合細(xì)胞培養(yǎng)體系，觀察大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)異種小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響。在此基礎(chǔ)上通過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植并建立混合嵌合體，研究其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的影響，從而探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在延遲性排斥反應(yīng)中的作用。 方法：體外建立混合細(xì)胞培養(yǎng)體系，分為四組：Ⅰ組：小鼠淋巴細(xì)胞+ConA、Ⅱ組：大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞+小鼠淋巴細(xì)胞+ConA、Ⅲ組：小鼠淋巴細(xì)胞+大鼠內(nèi)皮細(xì)胞、Ⅳ組：大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞+小鼠淋巴細(xì)胞+大鼠內(nèi)皮細(xì)胞。比較Ⅰ、Ⅱ組

2、刺激效應(yīng)及用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)Ⅲ、Ⅳ組中大鼠內(nèi)皮細(xì)胞ICAM*1和VCAM1的表達(dá)水平。 取大鼠SD大鼠作為供體，KM小鼠10只作為受體，所有小鼠受體接受<'60>Co γ(0.5Gy/分鐘，總劑量3．5Gy)射線全身照射，經(jīng)環(huán)磷酰胺預(yù)處理，照射后4h內(nèi)經(jīng)尾靜脈輸注液體0.3ml。隨后進(jìn)行動(dòng)物分組，A、輸注生理鹽水；B、輸注大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(2×10<'7>)。接著取移植后18天的受體小鼠淋巴細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，以大鼠淋

3、巴細(xì)胞為刺激細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLR)實(shí)驗(yàn)，觀察刺激效應(yīng)。應(yīng)用流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡測(cè)定預(yù)處理18天及30天后受體小鼠外周血中大鼠細(xì)胞的嵌合率。預(yù)處理后第18天取小鼠淋巴細(xì)胞和大鼠內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)A、B組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)水平。 結(jié)果：體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系：Ⅰ組及Ⅱ組OD值分別是1.25±0.07、0.51±0.02，兩者相比有顯著差異(P<0.05)；雙抗

4、體夾心ELdSA法檢測(cè)Ⅲ、Ⅳ組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)水平：Ⅲ組VCAM-1和ICAM-1表達(dá)水平分別是569.32±81.12ng/ml和278.6±66．4ng/ml，Ⅳ組分別是398.38±23.09ng/ml和203.1±30 ng/ml；Ⅳ組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)水平較Ⅲ組相比有顯著差異(P<0.05)。 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后18天受體小鼠脾細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞與大鼠脾細(xì)胞為刺

5、激細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，測(cè)量其OD值，A組0.7±0.07,B組0.62±0.02,0組0.32±0.01；A組與B組比較有顯著差異(P<0.05)。B組動(dòng)物接受大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植18天和30天后均檢測(cè)到一定比例的嵌合體細(xì)胞，18天嵌合率(8.6±0.2)％，30天嵌合率(1.8±0.1)％，18天嵌合率明顯高于30天(P<0.05)。預(yù)處理后第18天用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)A、B組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-

6、1的表達(dá)水平：A組VCAM-1和ICAM-1表達(dá)水平分別是475.90±49.52ng/ml和220.75±38．54ng/ml，B組分別是383.81±29.26ng/ml和158.91±17.28ng/ml；移植后B組VCAM-1和ICAM-1水平下降，A組和B組比較有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論：(1)體外實(shí)驗(yàn)中，供體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以抑制異種淋巴細(xì)胞增殖；(2)采用非清髓性方案預(yù)處理后行供體骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(