MICA基因多態(tài)性與習(xí)慣性流產(chǎn)、不孕癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：(1)研究湖南和湖北地區(qū)漢族人群中MICA基因多態(tài)性分布特征；(2)研究MICA基因多態(tài)性與習(xí)慣性流產(chǎn)、不孕癥的關(guān)系，并進(jìn)一步探討可能的分子機(jī)制。
　　 方法：(1)PCR-SSP法分析162例湖南地區(qū)漢族人群和193例湖北地區(qū)漢族人群MICA基因外顯子2～4的多態(tài)性，并與其他人群中該基因的分布進(jìn)行比較；(2)PCR—SSP方法檢測56例習(xí)慣性流產(chǎn)患者和78例正常對照的MICA基因外顯子2～4多態(tài)性分布，并進(jìn)行相關(guān)性分析；

2、(3)PCR-SSP法檢測214例不孕癥患者M(jìn)ICA基因外顯子2～4多態(tài)分布，ELISA法檢測患者血清抗沙眼衣原體IgG抗體，并進(jìn)行相關(guān)性分析；(4)直接測序法確定HeLa細(xì)胞和U373細(xì)胞的MICA基因型；通過實時定量PCR、Western blot和流式細(xì)胞術(shù)分別從mRNA、蛋白質(zhì)水平檢測沙眼衣原體感染HeLa細(xì)胞和U373細(xì)胞后，不同時間點(Oh、12h、24h、36h)MICA mRNA、MICA總蛋白和細(xì)胞膜表面MICA分子的

3、變化，并通過體外細(xì)胞毒實驗檢測NK細(xì)胞對沙眼衣原體感染的HeLa細(xì)胞和U373細(xì)胞在不同時間點(0h、12h、24h、36h)的殺傷效應(yīng)。
　　 結(jié)果：(1)湖南漢族人群中共檢測到11個MICA等位基因，其中MICA*0080I/02等位基因頻率最高(40.4％)，其次為MICA*0020I/020(20.1％)和MICA*010(17.3％)，MICA*019(0.3％)和MICA*031(O.3％)等位基因頻率最低；湖北漢族

4、人群中共檢測到13個MICA等位基因，其中MICA*0080I/02等位基因頻率最高(33.7％)，其次為MICA*010(18.4％)、MICA*0020I/020(13.9％)和MICA*0120I/02(9.6％)，MICA*005(0.5％)和MICA*027(0.5％)等位基因頻率最低；兩個地方人群MICA等位基因分布頻率與其他人群(朝鮮人、泰國人、美洲白人和非洲裔美洲人)比較，有顯著性差異(P

5、者組中共檢測出8個MICA等位基因，其中MICA*0080I/02等位基因分布頻率較高而MICA*018等位基因分布頻率最低；正常對照組中共檢出9個MICA等位基因，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，其中也是MICA*0080I/02等位基因分布頻率較高，而MICA*005和MICA*0120I/02等位基因分布頻率最低，習(xí)慣性流產(chǎn)患者與正常對照組之間MICA各等位基因分布頻率均無顯著性差異(P〉O.05)；(3)有輸卵管病理改變的不孕癥患者中66.7％(

6、42/63)的個體抗沙眼衣原體IgG抗體陽性，而無輸卵管病理改變的不孕癥患者中僅39.1％(59/151)的個體抗沙眼衣原體IgG抗體陽性(OR：3.12，95％CI：1.68—5.78，P=0.004)，高水平的抗沙眼衣原體IgG抗體增加了不孕癥患者輸卵管發(fā)生病理改變的風(fēng)險性(OR：6.88，95％CI：3.34—14.20，P=0.001)；根據(jù)抗沙眼衣原體IgG抗體是否為陽性對不孕癥患者進(jìn)行分組，兩組中共檢測到9個MICA等位基因

7、，其中等位基因MICA*008在兩組間的分布存在差異，抗沙眼衣原體IgG抗體陰性的不孕癥患者組MICA*008分布頻率顯著高于抗沙眼衣原體IgG抗體陽性的不孕癥患者組(38.1％：22.3％，P=0.0004，Pc=0.00367，OR：2.14，95％CI：1.40—3.28)；根據(jù)是否存在輸卵管病理改變對不孕癥患者進(jìn)行分組，兩組間MICA等位基因分布頻率無顯著性差異(P〉0.05)；根據(jù)是否有輸卵管病理改變對抗沙眼衣原體IgG抗體陽

8、性的不孕癥患者進(jìn)行分組，兩組間MICA等位基因分布頻率無顯著性差異(P>O.05)；(4)HeLa細(xì)胞為MICA*008純合子，U373細(xì)胞為MICA*001純合子；沙眼衣原體感染HeLa細(xì)胞和U373細(xì)胞0h～36h時兩細(xì)胞的MICAmRNA變化趨勢相同，其中0h時MICAmRNA均有低水平的表達(dá)，12h時表達(dá)水平升高，24～36h時表達(dá)水平降低；沙眼衣原體感染HeLa細(xì)胞0h～36h時MICA蛋白表達(dá)水平未降低；沙眼衣原體感染U37

9、3細(xì)胞0h～12h時MICA蛋白表達(dá)水平降低不明顯，24h～36h時蛋白表達(dá)水平降低；沙眼衣原體感染HeLa細(xì)胞0h～36h時細(xì)胞膜MICA蛋白表達(dá)水平較穩(wěn)定，沙眼衣原體感染U373細(xì)胞0h～12h時細(xì)胞膜MICA蛋白表達(dá)水平變化不明顯，24h～36h時表達(dá)水平降低；隨感染時間的延長(0h～36h)，NK細(xì)胞對沙眼衣原體感染HeLa細(xì)胞的殺傷效應(yīng)不斷增高；NK細(xì)胞對沙眼衣原感染的U373細(xì)胞12h殺傷效應(yīng)增高，24h～36h殺傷效應(yīng)降低

10、。
　　 結(jié)論：(1)湖南和湖北漢族人群MICA外顯子2～4等位基因的分布頻率與其他人群之間存在差異，其中MICA*00801/02等位基因分布頻率均較高；(2)MICA外顯子2～4等位基因多態(tài)性分布與習(xí)慣性流產(chǎn)之間無相關(guān)性；(3)不孕癥患者抗沙眼衣原體IgG抗體水平與其輸卵管病理改變相關(guān)；(4)不孕癥患者M(jìn)ICA*008等位基因分布頻率與抗沙眼衣原體IgG抗體負(fù)相關(guān)；(5)不孕癥患者M(jìn)ICA基因的多態(tài)性分布與輸卵管病理改變、沙