腫瘤壞死因子及其基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系的研究.pdf

1、近年來，各國學(xué)者致力于尋找不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的易感基因，易感基因的篩選主要集中在與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)危險(xiǎn)因素相關(guān)的基因上。研究表明，不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)是由母體免疫因素異常引起，即母體免疫系統(tǒng)對(duì)胎兒抗原免疫識(shí)別低下或反應(yīng)不足?，F(xiàn)已知，機(jī)體內(nèi)免疫反應(yīng)主要由人類白細(xì)胞抗原(HLA)復(fù)合體內(nèi)基因調(diào)控，并已發(fā)現(xiàn)HLA與許多免疫有關(guān)的疾病相關(guān)。因此，我們設(shè)想引起習(xí)慣性流產(chǎn)的免疫學(xué)因素可能受到HLA區(qū)域內(nèi)或與HLA連鎖的某基因所影響。本研究運(yùn)用聚合酶

2、鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性方法(PCR-RFLP)，分析原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者的HLA區(qū)域中TNF等位基因以及它與TNF水平的關(guān)系，本研究旨在探討對(duì)TNF-α和TNF-β基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系，探討它們和不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)病有無相互作用，尋找基因—基因相互作用而產(chǎn)生不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的易感復(fù)合基因型。探討不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)患者TNF等位基因與TNF水平的關(guān)系，尋找不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的易感基因，從分子遺傳學(xué)角度發(fā)現(xiàn)不明原

3、因習(xí)慣性流產(chǎn)的高危人群，從而對(duì)人群進(jìn)行篩選，早期對(duì)攜帶易感基因的人群給予干預(yù)措施，為找出個(gè)體化預(yù)防和治療不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的方法提供理論基礎(chǔ)。 材料與方法1研究對(duì)象：均為漢族人，各研究對(duì)象之間無血緣關(guān)系。不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組為臨床確診的習(xí)慣性流產(chǎn)患者50例，不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)診斷標(biāo)準(zhǔn)依照全國統(tǒng)編教材婦產(chǎn)科學(xué)第6版，平均年齡31.4±5.5歲；孕周6～10周，平均孕周7.6周；孕次3～6次，平均孕次4次；排除解剖遺傳、內(nèi)分泌、感染

4、、抗精子抗體陽性、ABO血型不合因素。對(duì)照組共50例，為年齡及孕周與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組相匹配的正常妊娠婦女，無不孕、流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史。所有研究對(duì)象均除外系統(tǒng)疾病。 2、人外周血白細(xì)胞DNA的提取：靜脈血2ml，EDTA抗凝，采用美國Gentra公司的DNA抽提試劑盒，抽提基因組DNA。 3、TNFα-308G/A基因多態(tài)性的檢測：參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增TNFα-308G/A基因后的產(chǎn)物長度為116bp，產(chǎn)物用N

5、coI限制性內(nèi)切酶酶切，用3.5％瓊脂糖凝膠電泳后，觀察酶切后的產(chǎn)物長度。 4、TNF-βG252A基因多態(tài)性的檢測：參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增TNF-βG252A基因后的產(chǎn)物長度為740bp，產(chǎn)物用NcoI限制性內(nèi)切酶酶切，用1.5％的瓊脂糖凝膠電泳后，觀察酶切后的產(chǎn)物長度。 5、血漿TNF水平測定取靜脈血2ml，注入含10％依地酸二納(EDTA)30ul，在4℃下離心10min，取血漿置-20℃保存至同批測定。放免

6、法測量血漿TNF水平(試劑盒由北京北免東雅生物技術(shù)研究所提供)。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較用χ2檢驗(yàn)。 結(jié)果：1、血漿中TNF水平，不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組明顯高于對(duì)照組，兩組之間比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。 2、TNFα-308G/A基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系：不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組與正常對(duì)照組之間TNFα-

7、308G→A突變無顯著差異(p＞0.05)。 3、不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組與對(duì)照組TNFα-308G/A基因三種基因型攜帶者組間血漿TNF水平比較無顯著性差異(p＞0.05)。 4、TNFTNF-βG252A基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系：不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組*2/*2和1*/2*基因型頻率較對(duì)照組增加，而*1/*1基因型頻率較對(duì)照組則減少；不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組TNFβ2*基因頻率較對(duì)照組增加，TNFβ1*基因頻率較對(duì)

8、照組減少；但只有*1/*1基因型、TNFβ1*和TNFβ2*基因頻率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5、不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組與對(duì)照組TNF-βG252A基因三種基因型攜帶者組間血漿TNF水平比較無顯著性差異。 6、TNFα-308G/A和TNF-βG252A復(fù)合突變與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系：TNFα-308G/A和TNF-βG252A的復(fù)合基因型TNFα1*/1*TNFβ1*/1*在不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組較對(duì)照組明顯降低，差異有顯

9、著性差異(p＜0.05)，TNFα-308G/A和TNF-βG252A的其他復(fù)合基因型在不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組和對(duì)照組之間無顯著性差異。 結(jié)論：1、不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組血漿TNF水平明顯高于對(duì)照組。 2、TNFα-308G/A基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)無顯著相關(guān)，TNF-βG252A基因多態(tài)性與不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)有顯著相關(guān)。 3、TNFα-308G/A和TNF-βG252A各復(fù)合基因型在不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)組和對(duì)