嗅鞘細胞與睫狀神經營養(yǎng)因子在視神經損傷治療中的協(xié)同作用.pdf

1、[目的] 視神經損傷后難以再生,至今尚未找到促進損傷視神經完全修復的方法。近來研究證明,嗅鞘細胞及睫狀神經營養(yǎng)因子均可有效促進損傷神經修復再生。本研究首次將尚處于實驗階段的嗅鞘細胞移植術和已進入臨床應用的睫狀神經營養(yǎng)因子(CNTF)玻璃體內注射聯(lián)合應用,以期達到更理想的治療視神經損傷的效果,為臨床救治視神經乃至中樞神經損傷提供新思路及實驗依據(jù)。 [方法] 本研究應用該校神經生物學教研室的OECs原代培養(yǎng)技術,體外培養(yǎng)純化OECs

2、。然后建立成年SD大鼠視神經吸斷傷模型：本實驗采取經眶上緣暴露視神經的方法制作視神經吸斷傷模型,將體外培養(yǎng)純化的OECs植入球后視神經鞘膜下視神經軸突的吸斷處,同時玻璃體內注射CNTF。按治療手段不同,將實驗大鼠分為對照組、CNTF組、OECs組和OECs+CNTF聯(lián)合應用組。術后4w,采用霍亂毒素B亞單位(CTB)順行示蹤技術及熒光金(FG)、生物素化葡聚糖胺(BDA)逆行示蹤技術評價OECs和CNTF對視網膜神經節(jié)細胞存活和視神經軸

3、突再生的影響。通過計算視網膜上相同視野下視網膜神經節(jié)細胞即神經元的存活數(shù)、神經元的突起長度和密度進行方差分析和多元線性回歸分析,評價OECs和CNTF對視網膜神經節(jié)細胞及其軸突的逆行性保護作用,比較OEgs、CNTF單獨應用及聯(lián)合應用對損傷視神經修復再生的影響,驗證二者的協(xié)同作用。 [結果] 一、成功進行OECs體外原代培養(yǎng)和純化 應用原代培養(yǎng)技術,并用差速貼壁、阿糖胞苷抑制和Forskolin.SPE營養(yǎng)物處理

4、,從2.5月成年大鼠的嗅球分離、培養(yǎng)和純化OECs。根據(jù)p75 NGFR免疫細胞熒光染色及Hoechst細胞核標記染色分析了所得細胞的純度并對不同培養(yǎng)時期的細胞活性進行比較。成年大鼠來源的OECs純化周期為10d,所得純度可達95％以上,純化后12-14d左右細胞活力開始下降。成年大鼠來源的OECs所得純度較高,有利于進一步研究。 二、OECs和CNTF對大鼠視神經損傷后神經元的保護作用 建立成年SD大鼠視神經吸斷傷模型

5、,將體外培養(yǎng)純化的OECs植入視神經吸斷處鞘膜下,同時玻璃體注射CNTF。按治療手段不同,將實驗大鼠分為對照組、CNTF組、OECs組和OECs+CNTF聯(lián)合應用組。4w后,通過計算視網膜上相應象限視網膜神經節(jié)細胞即神經元的存活數(shù)、神經元的突起長度和密度進行方差分析和線性回歸分析,評價OECs和CNTF對視網膜神經節(jié)細胞及其軸突的逆行性保護作用。與正常眼大鼠視網膜神經節(jié)細胞數(shù)量相比,對照組損傷眼神經元明顯減少。各治療組視網膜神經節(jié)細胞存

6、活數(shù)明顯多于對照組,且神經元軸突長度及密度也均大于對照組。OECs組的視網膜神經節(jié)細胞存活數(shù)高于CNTF組,證明OECs保護視神經元作用強于CNTF。 三、OECs和CNTF在視神經損傷修復過程中具有協(xié)同作用 在觀測、統(tǒng)計上述各視神經損傷指標時發(fā)現(xiàn),與CNTF或OECs單用組相比,CNTF和OECs聯(lián)合應用組對視神經損傷的修復作用最強。提示CNTF和IOECs在視神經損傷修復治療中具有協(xié)同作用。 [結論]局部應用