膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與PC12工程細胞在大鼠脊髓損傷治療中的協(xié)同作用.pdf

1、目的研究膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營樣因子(GNDF)和PC12-GFR(1-RET基因工程細胞對脊髓半損傷大鼠神經(jīng)元存活和纖維再生的協(xié)同作用.探討GDNF的神經(jīng)營養(yǎng)作用途徑及其作用機制.方法應用細胞轉(zhuǎn)染、G418篩選和挑選單克隆的細胞培養(yǎng)技術(shù),構(gòu)建高表達GDNF受體GFR(1和RET蛋白的基因工程細胞株P(guān)C12-GFR(1-RET.在建立成年SD大鼠脊髓T8半橫斷損傷模型的基礎(chǔ)上,將體外培養(yǎng)的PC12-GFR(1-RET工程細胞移植入脊髓損傷腔

2、,同時局部應用GDNF.采用斜板實驗和BBB聯(lián)合功能評分觀察大鼠功能恢復情況,并通過辣根過氧化物酶逆行示蹤技術(shù)評價PC12-GFR(1-RET工程細胞和GDNF對神經(jīng)元存活和纖維再生的影響.結(jié)果單獨應用GDNF,皮質(zhì)神經(jīng)元比對照組明顯增大,紅核中兩者雖無統(tǒng)計學差異,但GDNF組大神經(jīng)元數(shù)目(600(m<'2>以上)多于對照組;PC12-GFR(1-RET工程細胞組皮質(zhì)和紅核神經(jīng)元均比GDNF組明顯增大.說明局部應用外源性GDNF和PC1

3、2-GFR(1-RET工程細胞都能減輕脊髓半橫斷損傷后引起的逆性皮質(zhì)和紅核神經(jīng)元損害.單獨應用PC12-GFR(1-RET工程細胞可促進脊髓下行長傳導束再生和肢體運動功能恢復;而單獨應用GDNF可促進損傷后早期后肢運動功能的恢復,而對損傷后8周軸突再生和后肢運動功能無明顯影響.觀測、統(tǒng)計上述各脊髓損傷指標發(fā)現(xiàn):PC12-GFR(1-RET工程細胞和GD-NF聯(lián)合應用對脊髓損傷的修復作用強于GDNF或PC12-GFR(1-RET工程細胞單