力學刺激對兔角膜基質(zhì)細胞增殖及bFGF表達的影響.pdf

1、準分子激光原位角膜磨鑲術(laser in situ keratomileusis,LASIK)是目前開展較為廣泛且應用于臨床效果良好的治療近視的角膜屈光手術。每年有近百萬人接受LASIK手術治療。LASIK手術主要通過改變角膜中央光學區(qū)的曲率,使屈光不正現(xiàn)象得以改善。此手術在角膜瓣下的基質(zhì)層中進行,這樣做既保存了角膜上皮層和前彈力層的完整度,同時又可防止角膜上皮下霧狀渾濁(Haze)的發(fā)生。
　　 LASIK術后角膜損傷修復過

2、程是多因素參與的復雜過程。其中,力學環(huán)境的改變對LASIK術后角膜組織的修復是一個不可忽視的因素。LASIK術后角膜層變薄,在相同的眼內(nèi)壓作用下,角膜所受的應力明顯增大,角膜成纖維細胞的力學環(huán)境發(fā)生了變化,可能影響其生長、增殖。堿性成纖維細胞生長因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)既能促進傷口愈合與受損組織的修復還能促使受損細胞發(fā)生相應的形態(tài)學改變。因此研究在體及離體不同力學環(huán)境下,角膜組織及角

3、膜成纖維細胞中bFGF的表達與分布,以及力學刺激對兔角膜基質(zhì)細胞增殖的影響,探究力學因素在LASIK術后角膜損傷修復中的作用,為臨床治療近視提供有力的理論依據(jù)和指導。本文的主要研究內(nèi)容及結論如下:
　　 1.建立不同切削量的LASIK手術動物模型,使在體角膜處于不同力學環(huán)境中,采用免疫熒光染色觀察角膜上皮及基質(zhì)層中bFGF表達;蘇木素-伊紅(HE)染色觀察角膜基質(zhì)細胞增殖的變化。研究發(fā)現(xiàn):bFGF在上皮及基質(zhì)層中均有表達,但基質(zhì)

4、層中熒光強度總體高于上皮層,70％一周組基質(zhì)層熒光強度明顯強于上皮層(P＜0.05);與正常組相比,術后1周角膜細胞數(shù)量先減少,術后1月細胞數(shù)量增多。同一手術方式術后1月細胞數(shù)量顯著多于1周(P<0.05)。
　　 2.于LASIK術后1周和1月處死實驗動物提取組織蛋白,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測bFGF含量。研究發(fā)現(xiàn):LASIK術后1周,角膜基質(zhì)床殘余30%組與對照組相比,bFGF含量顯著增高(P<0.05);

5、LASIK術后1月,角膜基質(zhì)床殘余30%組bFGF含量回落至正常水平,不同手術組之間無顯著性差異;不同時間點同一手術方式之間比較發(fā)現(xiàn),僅角膜基質(zhì)床殘余30%組1周和1月有顯著差異(P<0.05)。
　　 3.體外采用Fx-4000細胞力學柔性基底拉伸系統(tǒng),對原代提取的兔角膜成纖維細胞分別進行頻率為0.1Hz、拉伸幅度為5%、10%、15%的周期性機械拉伸,并于6h和24h收集細胞培養(yǎng)液上清,采用ELISA法檢測bFGF的含量。研