LY294002對bFGF誘導的兔眼晶狀體上皮細胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　 隨著白內障手術的不斷完善，以往的白內障手術并發(fā)癥，如：玻璃體前界膜破裂致玻璃體脫出、角膜失代償、虹膜睫狀體炎、眼內炎、青光眼、人工晶狀體脫位及半脫位等已明顯減少，而晶狀體后囊膜混濁(Posterier CapsulerOpacification，PCO)已成為現(xiàn)代白內障手術(囊外摘除及人工晶體植入)術后的主要并發(fā)癥之一。
　　 多年來預防后發(fā)障發(fā)生的研究主要集中在抑制殘留的晶體上皮細胞繼續(xù)增殖和遷移。其中包

2、括非藥物性和藥物性兩個方面。因非藥物性抑制晶體上皮細胞生長繁殖的研究沒能得出滿意的結果，目前的研究則主要集中在藥物抑制晶狀體上皮細胞增殖。而近些年研究的一些藥物，如：抗代謝藥物，天然草藥，組織纖溶酶原激活劑，抗炎藥，免疫毒素及細胞毒素等均因其毒副作用較強而未應用于臨床。近幾年的研究則側重于通過不同途徑影響bFGF的促增殖作用而抑制晶狀體上皮細胞的增殖和遷移。
　　 LY294002為磷酸肌醇3激酶(phosphatidylino

3、sitol3-kinase，PI3K)通道抑制劑，PI3K是許多生命活動中關鍵的信號分子，參與調節(jié)細胞的分裂、分化、凋亡等活動，并已報道其也參與LECs的增殖[1，8]。絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT(serine/theonine kinase AKT，又稱為PKB)是P13K下游直接的靶蛋白，AKT是一種多功能調節(jié)因子，參與細胞生存和凋亡的調控。
　　 多種生長因子都能通過生長因子受體上酪氨酸(Y740/Y751)位點磷酸化后產(chǎn)生

4、與P13K的p85亞基結合的高親和位點，誘導PKB的激活，此激活過程能被P13K特異抑制劑wortmannin及LY294002所阻斷。主要機制為wortmannin及LY294002與P13K的p110亞基呈非競爭性不可逆性結合，從而阻斷下游AKT的激活，起到抑制細胞增殖和遷移的作用。磷酸肌醇3激酶(P13K)通道抑制劑的毒副作用較小有望成為預防PCO的理想藥物。
　　 本實驗將不同濃度的LY294002加入體外培養(yǎng)的兔晶狀體

5、上皮細胞干預其增殖。通過MTT檢測細胞抑制率及流式細胞儀分析細胞周期。觀察LY294002對兔眼晶狀體上皮細胞的抑制程度及對bFGF促進增殖作用的影響。
　　 材料與方法
　　 體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細胞分為實驗組和對照組，其中對照組包括空白對照和bFGF對照組，實驗組包括單獨用LY294002和聯(lián)合用bFGF組，空白對照組為不含血清的DMEM培養(yǎng)液，bFGF對照組為空白對照這組+bFGF(10ng/mL)，藥物處理組分

6、為兩組：①5個單獨用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)；②5個聯(lián)合用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)+bFGF(10ng/mL)。取生長良好的第3代兔LEC細胞傳代于培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶中，常規(guī)培養(yǎng)后，按上述分組加入不同濃度藥物，培養(yǎng)48小時后MTT檢測抑制率及流式細胞儀檢測細胞周期。
　　

7、 結果：
　　 1.MTT檢測LY294002對LEC增殖的抑制作用
　　 在單獨應用LY294002組內，各LY294002組與空白對照組相比顯示：10-8mol/L作用48 h后對兔LECs無明顯抑制作用(P>0.01)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48 h后均對兔LECs有明顯的抑制作用(P<0.01)；各聯(lián)合用藥組與陽性對照組相比，10-8mol/L作用48 h后對兔LECs有輕微抑制

8、作用(P=0.008)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48 h后均對兔LECs有明顯的抑制作用(P<0.01)；空白對照組與陽性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 2.LY294002對兔LEC的細胞周期的影響
　　 兔LEC經(jīng)LY294002作用48h后，實驗組與對照組相比，G0/G1期細胞增多，而S期和G2/M期細胞減少。
　　 細胞G0/G1期分析示：LY294002組

9、，10-8 mol/L濃度作用48 h后，與空白對照組相比對兔LECs無明顯抑制作用(P>0.01)；10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48h后，與空白對照組相比對兔LECs均有明顯的抑制作用(P<0.01)；聯(lián)合用藥組內，10-8mol/L濃度作用48 h后，與陽性對照組相比對兔LECs無明顯抑制作用(P>0.01)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48 h后，與陽性對照組相比對兔LECs均有

10、明顯的抑制作用(P<0.01)；空白對照組與陽性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，S期及G2/M期分析結果大致同G0/G1期。
　　 結論：
　　 1.LY294002能抑制兔眼晶狀體上皮細胞的增殖。
　　 2.bFGF能促進兔眼晶狀體上皮細胞的增殖，并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體上皮細胞明顯增多。
　　 3.高濃度LY294002能將bFGF的促細胞增殖作用阻斷，并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體