氯化錳對(duì)小鼠中樞神經(jīng)、生殖系統(tǒng)的毒性研究.pdf

1、目的：長(zhǎng)期接觸錳可以發(fā)生慢性錳中毒。在工礦企業(yè)生產(chǎn)作業(yè)過(guò)程中，礦工、鋼鐵冶煉及工廠車(chē)間的電焊工人為主要的職業(yè)接觸人群。為了進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)更為敏感特異的診斷指標(biāo)，以早期篩查出亞臨床中毒者并對(duì)其治療，為今后制定出出相應(yīng)的預(yù)防措施提供科學(xué)參考依據(jù)，本文通過(guò)測(cè)定腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量；腦、睪丸組織的脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)；結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)等方法研究氯化錳對(duì)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)的毒性作用。 方法：將90只雄性昆明系小鼠隨機(jī)分為

2、3組，分別為對(duì)照組、15mg/kg及30mg/kg實(shí)驗(yàn)組，每日腹腔注射染毒。連續(xù)染毒60天之后，頸椎脫臼處死。分三部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)： 一、研究氯化錳對(duì)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性：主要包括腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量測(cè)定、腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)測(cè)定、腦組織調(diào)亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)。 二、研究氯化錳對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)的毒性：主要包括睪丸組織脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)測(cè)定、精子畸形以及精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的測(cè)定、睪丸組織調(diào)亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)。 三、購(gòu)得高分化PC

3、12細(xì)胞株用細(xì)胞培養(yǎng)的方法完成細(xì)胞毒試驗(yàn)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞線粒體跨膜電位的測(cè)定。 結(jié)果： 一、氯化錳對(duì)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性(一)腦組織中多巴胺(Dopamine，DA)、去甲腎上腺素(Noerpinephrine，NE)、以及五羥色胺(5-hydroxyptamine，5-HT)的含量均有不同程度下降。而且隨著染毒劑量的增加，單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量不斷降低。(二)腦組織中的谷光甘

4、肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)以及總抗氧化能力(Total antioxidant capacity，T-AOC)兩項(xiàng)指標(biāo)呈下降的趨勢(shì)，且T-AOC在各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量隨著染毒劑量增加不斷增多。(三)腦組織內(nèi)P53蛋白光密度呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，灰度呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

5、.05)，而B(niǎo)cl-2蛋白平均光密度、灰度值分別成上升、下調(diào)趨勢(shì)，且只有30mg/kg實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 二、氯化錳對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)的毒性(一)睪丸組織中的GSH-PX以及T-AOC兩項(xiàng)指標(biāo)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，且T-AOC在30mg/kg實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MDA含量增高且在各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各實(shí)驗(yàn)組精子畸形分析可知，精子畸變率均

6、較低且畸變精子的構(gòu)成多以無(wú)定形和無(wú)鉤為主。30mg/kg實(shí)驗(yàn)組曲線速度(Curvilinear velocity，VCL)、直線速度(Straight line velocity，VSL)與對(duì)照組相比有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(二)睪丸組織中P53蛋白主要在各級(jí)細(xì)胞中表達(dá)，而B(niǎo)cl-2蛋白則主要在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。P53蛋白光密度呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，灰度呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，且只有30mg/kg實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P<0.01)。Bcl-2蛋白平均光密度與灰度值分別也成上升、下調(diào)的趨勢(shì)，且30mg/kg實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 三、氯化錳對(duì)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞PCI2的毒性研究100～900μmol/L，氯化錳(Manganese Chloride，MnCl2)對(duì)PC12細(xì)胞均有抑制作用，但程度不同，各劑量組對(duì)細(xì)胞的抑制率均低于50％。五個(gè)劑量組對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的抑制率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的上升而增加。流式細(xì)胞儀測(cè)

8、定結(jié)果表明，與對(duì)照組相比可以看出，當(dāng)MnCl2的作用時(shí)間達(dá)到72h的時(shí)候，細(xì)胞周期發(fā)生了明顯的改變，G1期在對(duì)照組、500、700、900μmol/L組分布呈遞增趨勢(shì)，S期分布呈遞減趨勢(shì)，表明隨著濃度的增加，細(xì)胞周期被阻滯在DNA合成期的可能性較大。另外，當(dāng)MnCl2的作用時(shí)間達(dá)到72h細(xì)胞凋亡明顯，說(shuō)明隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)生的凋亡作用越來(lái)越強(qiáng)。PC12細(xì)胞內(nèi)羅丹明123(Rhodamine123，Rh123)熒光強(qiáng)度與對(duì)照組相比均有