臍血CD133+內皮祖細胞的分離培養(yǎng)及高糖對其功能影響的初步研究.pdf

1、第一部分 目的：建立臍血CDl33+內皮祖細胞分離與培養(yǎng)的方法。 方法： 1.淋巴細胞分離液分離臍血單個核細胞。 2.磁性細胞分選系統(tǒng)聯(lián)合CD133細胞分離試劑盒分離CD133+細胞。 3.應用低糖DMEM培養(yǎng)基添加VEGF、bFGF、IGF-1培養(yǎng)細胞。 4.檢測細胞吞噬ac-LDL能力。 結果：1.獲得的臍血單個核細胞數(shù)為(10.6±7.8)×107/ml，CD133+細胞數(shù)為

2、(4.3±2.3)×105/ml。經流式細胞儀檢驗CD133+細胞的純度為81-90％。CD133-細胞占單個核細胞比例為(O.45±0.15)％。2.培養(yǎng)的細胞6-8小時開始貼壁，4-5天呈鋪路石樣改變，一周左右呈梭形，并有克隆形成，10天左右可發(fā)現(xiàn)開始形成血管樣結構。3.培養(yǎng)的細胞能夠吞噬ac-LDL。 結論：1.磁珠細胞分選是分離臍血CD133+細胞的較好方法。2.臍血CD133+細胞能夠分化為內皮樣細胞，CD133可作為

3、內皮祖細胞分選的表面標志。 第二部分 目的：觀察高糖對內皮祖細胞增殖和細胞因子表達的影響。 方法： 1.應用高糖(15mM)干預細胞。 2.XTT法檢測高糖干預下細胞增殖能力變化。 3.蛋白芯片檢測短期高糖干預下內皮祖細胞細胞因子表達的變化。 結果：1.高糖條件下，干預時間小于4天的細胞增殖增加，4天以上的增殖抑制。 2.高糖條件下CD133+內皮祖細胞表達的細胞因子上調的