臍血CD133+內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)及高糖對(duì)其功能影響的初步研究.pdf

1、第一部分 目的：建立臍血CDl33+內(nèi)皮祖細(xì)胞分離與培養(yǎng)的方法。 方法： 1.淋巴細(xì)胞分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞。 2.磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)聯(lián)合CD133細(xì)胞分離試劑盒分離CD133+細(xì)胞。 3.應(yīng)用低糖DMEM培養(yǎng)基添加VEGF、bFGF、IGF-1培養(yǎng)細(xì)胞。 4.檢測(cè)細(xì)胞吞噬ac-LDL能力。 結(jié)果：1.獲得的臍血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)為(10.6±7.8)×107/ml，CD133+細(xì)胞數(shù)為

2、(4.3±2.3)×105/ml。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢驗(yàn)CD133+細(xì)胞的純度為81-90％。CD133-細(xì)胞占單個(gè)核細(xì)胞比例為(O.45±0.15)％。2.培養(yǎng)的細(xì)胞6-8小時(shí)開(kāi)始貼壁，4-5天呈鋪路石樣改變，一周左右呈梭形，并有克隆形成，10天左右可發(fā)現(xiàn)開(kāi)始形成血管樣結(jié)構(gòu)。3.培養(yǎng)的細(xì)胞能夠吞噬ac-LDL。 結(jié)論：1.磁珠細(xì)胞分選是分離臍血CD133+細(xì)胞的較好方法。2.臍血CD133+細(xì)胞能夠分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞，CD133可作為

3、內(nèi)皮祖細(xì)胞分選的表面標(biāo)志。 第二部分 目的：觀察高糖對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子表達(dá)的影響。 方法： 1.應(yīng)用高糖(15mM)干預(yù)細(xì)胞。 2.XTT法檢測(cè)高糖干預(yù)下細(xì)胞增殖能力變化。 3.蛋白芯片檢測(cè)短期高糖干預(yù)下內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的變化。 結(jié)果：1.高糖條件下，干預(yù)時(shí)間小于4天的細(xì)胞增殖增加，4天以上的增殖抑制。 2.高糖條件下CD133+內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子上調(diào)的