補(bǔ)氣通絡(luò)方對(duì)CFS大鼠NEI調(diào)節(jié)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 依據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論和參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用復(fù)合因素建立慢性疲勞綜合征(CFS)大鼠模型。從理論上深入探討及闡釋氣絡(luò)與CFS的關(guān)系；通過實(shí)驗(yàn)研究，驗(yàn)證氣絡(luò)與CFS相關(guān)的假設(shè)；并探索補(bǔ)氣通絡(luò)方改善CFS的作用機(jī)制。 材料和方法: 整理有關(guān)CFS的國內(nèi)外文獻(xiàn)，按照中醫(yī)理論歸納CFS與中醫(yī)臟腑經(jīng)絡(luò)氣血陰陽的關(guān)系．在綜合分析氣絡(luò)與NEI(神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò))、CFS相互關(guān)系的基礎(chǔ)上，通過邏輯推理，首次提出“CFS與氣絡(luò)相

2、關(guān)”的假說；并針對(duì)氣絡(luò)“虛、滯”的病機(jī)特點(diǎn)，結(jié)合臨床實(shí)際，篩選藥物組成補(bǔ)氣通絡(luò)方，以實(shí)驗(yàn)的方法，觀察補(bǔ)氣通絡(luò)方對(duì)CFS的作用機(jī)制，從而驗(yàn)證該假說的科學(xué)性和正確性。 清潔級(jí)Wistar雄性大鼠50只，隨機(jī)分成正常組(10只)、造模組(40只)，造模組動(dòng)物采用復(fù)合因素造模。造模過程：①運(yùn)動(dòng)造模制作160cm×80cm×60cm的注水鼠箱，水深30cm，水溫4℃左右。每日上午取40只大鼠，冷水(4℃)游泳，每次30min；連續(xù)21天②

3、房勞造模每晚讓造模大鼠與發(fā)情期雌鼠合籠(每次合籠都新?lián)Q一批雌鼠)；連續(xù)21天。③應(yīng)激造模每日下午用尖端纏有紗布的止血鉗夾其中一只大鼠尾部，讓每只大鼠被夾的機(jī)會(huì)均等，令其與其它大鼠撕打，模仿人類生存環(huán)境不佳，競(jìng)爭(zhēng)激烈，精神壓力大的情況；夾尾以不破皮、不流血為度，每次刺激2小時(shí)。定期更換夾尾大鼠，使造模結(jié)束時(shí)每只大鼠夾尾次數(shù)基本相同。連續(xù)21天。 造模結(jié)束后，比較正常組和模型組動(dòng)物體重、皮毛及其色澤、飲水量、進(jìn)食量、活動(dòng)量、精神狀態(tài)

4、等一般表現(xiàn)的差異，測(cè)定各組大鼠體力情況及疲勞程度。然后將造模組重新分為模型組(B)、補(bǔ)氣通絡(luò)方組(C)和補(bǔ)氣組(D)及通絡(luò)組(E)每組10只，與未造模的正常組(A)一起使參加實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物總數(shù)達(dá)到5組，共50只。重新分組后，A、B兩組灌胃生理鹽水2ml，C、D、E三組分別灌胃補(bǔ)氣通絡(luò)方、補(bǔ)氣方、通絡(luò)方的水煎液，連續(xù)灌胃14天。補(bǔ)氣通絡(luò)方由人參、黃芪、枳殼、川芎、地龍等組成，補(bǔ)氣方由人參、黃芪組成；通絡(luò)方由枳殼、川芎、地龍組成，三方均按人與動(dòng)

5、物體表面積折算法算得大鼠等效劑量為每公斤體重50g生藥。用5倍于藥材的冷水浸泡20分鐘，然后用武火煎至水沸，改用文火煎煮40分鐘，濾出藥液加冷水適量，煎至水沸，改用文火煎煮30分鐘，濾出藥渣，將兩次煎取藥液混勻濃縮成每毫升含生藥2g的藥液，3種藥液均置冰箱0-4℃保存，每次灌胃2ml。 灌胃結(jié)束后，檢測(cè)各組動(dòng)物下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量、肝糖原(LG)、肌糖原含量、血清超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、IL-1、β—EP、CRHm

6、RNA等指標(biāo)，探討補(bǔ)氣通絡(luò)方對(duì)CFS動(dòng)物模型的療效，及產(chǎn)生療效的作用機(jī)制。 結(jié)果: 造模結(jié)束后，模型組動(dòng)物體重減輕，進(jìn)食量、飲水量明顯減少(與正常組比較，p＜0.05)，鼠尾懸掛試驗(yàn)中，6分鐘內(nèi)不動(dòng)時(shí)間明顯增多(與正常組比較，p＜0.01．)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，6分鐘內(nèi)，模型大鼠穿格次數(shù)顯著降低(P＜0.05)，理毛時(shí)間極顯著增高(P＜0.05)；力竭游泳試驗(yàn)測(cè)試中，6分鐘內(nèi)，模型大鼠力竭時(shí)間顯著降低(P＜0.01)，

7、 下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量檢測(cè)結(jié)果：模型組動(dòng)物下丘腦DA含量明顯降低(p＜0.01)，5-HT含量明顯增高(p＜0.01)；治療后補(bǔ)氣通絡(luò)方組、補(bǔ)氣組、通絡(luò)組DA含量較模型組有明顯升高(p＜0.01)，但三者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。5-HT含量較模型組有明顯降低(p＜0.01)，說明三組都有明顯療效，但補(bǔ)氣通絡(luò)方組與通絡(luò)方組無顯著性差異(p＞0.05)，補(bǔ)氣通絡(luò)方組療效優(yōu)于補(bǔ)氣組(p＜0.05)。肝糖原含量模型組明顯低于正常組

8、(p＜0.01)、通絡(luò)組含量高于模型組，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，補(bǔ)氣通絡(luò)方組高于補(bǔ)氣組(p＜0.05)；說明補(bǔ)氣通絡(luò)方組療效優(yōu)于補(bǔ)氣組；肌糖原含量正常組高于模型組(p＜0.01)，治療后，補(bǔ)氣通絡(luò)方組、補(bǔ)氣組、通絡(luò)組肌糖原含量高于模型組(p＜0.01)，但三者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。SOD檢測(cè)結(jié)果中，模型組動(dòng)物SOD活性明顯低于其他組，說明CFS動(dòng)物體內(nèi)存在著清除自由基能力降低的現(xiàn)象。補(bǔ)氣通絡(luò)方組、補(bǔ)氣組、通絡(luò)

9、組SOD活性有所提高，說明補(bǔ)氣通絡(luò)方、補(bǔ)氣方、通絡(luò)方均具有一定的抗氧化能力，可以拮抗因?yàn)檫^度疲勞、睡眠障礙和精神緊張所帶來的氧自由基損害。并且三組在提高SOD活性方面無明顯差異(P＞0.05)。MDA檢測(cè)結(jié)果中，模型組MDA明顯高于正常組，說明模型組動(dòng)物體內(nèi)組織、器官遭受自由基損害非常突出。與模型組比較，補(bǔ)氣通絡(luò)方組MDA含量明顯降低(P＜0.05)，說明補(bǔ)氣通絡(luò)方有阻斷自由基毒性反應(yīng)的作用；而補(bǔ)氣組與通絡(luò)組MDA含量無顯著性差異(P＞

10、0.05)，說明此二組均無阻斷自由基毒性反應(yīng)的作用。垂體β—內(nèi)啡肽(β—EP)含量檢測(cè)中，模型組動(dòng)物垂體內(nèi)β—EP含量明顯高于正常組(P＜0.01)，說明復(fù)合因素造模法嚴(yán)重影響了β—EP的代謝，使其合成增加或降解減慢。補(bǔ)氣通絡(luò)方組、補(bǔ)氣組、通絡(luò)組陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞灰度值明顯低于模型組(P＜0.05)，接近正常組(P＞0.05)，提示三組能顯著降低垂體內(nèi)β—EP，對(duì)解除慢性疲勞有一定作用；補(bǔ)氣通絡(luò)方組陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞灰度值與補(bǔ)氣組、

11、通絡(luò)組有顯著性差異(P＜0.05)，證明補(bǔ)氣通絡(luò)方組療效優(yōu)于補(bǔ)氣組和通絡(luò)組。外周血IL-1含量檢測(cè)中，模型組動(dòng)物外周血IL-1含量明顯高于正常組(P＜0.01)，說明復(fù)合因素造模法嚴(yán)重影響了IL-1的代謝，使其合成增加或降解減慢。治療后，補(bǔ)氣通絡(luò)方組、補(bǔ)氣組、通絡(luò)組動(dòng)物外周血IL-1含量均低于模型組(P＜0.01)，說明三組均可以抑制IL-1的活性，增加其降解。而補(bǔ)氣通絡(luò)方組IL-1含量與補(bǔ)氣組、通絡(luò)組有顯著性差異(P＜0.05)，說明

12、補(bǔ)氣通絡(luò)方療效優(yōu)于補(bǔ)氣組與通絡(luò)組。下丘腦cRHmRNA表達(dá)情況檢測(cè)中，正常組動(dòng)物CRHmRNA表達(dá)情況最低，其半定量檢測(cè)結(jié)果明顯低于模型組(P＜0.01)。說咀采用復(fù)合因素造?？梢越档蛣?dòng)物CRHmRNA的表達(dá)，這可能是模型動(dòng)物運(yùn)動(dòng)能力下降的原因之一。經(jīng)用補(bǔ)氣通絡(luò)方、補(bǔ)氣方、通絡(luò)方治療后，造模動(dòng)物CRHmRNA的表達(dá)均明顯低于模型組(P＜0.01)，說明三組治療方法均有降低CRHmRNA表達(dá)的作用，可能是下調(diào)動(dòng)物下丘腦CRHmRNA的表達(dá)

13、，抑制了HPA軸功能，從而減輕CFS的疲勞、煩躁、失眠等表現(xiàn)。在療效上，補(bǔ)氣通絡(luò)方組CRHmRNA表達(dá)結(jié)果與補(bǔ)氣組、通絡(luò)組比較有顯著差異(P＜0.05)，說明補(bǔ)氣通絡(luò)方療效優(yōu)于補(bǔ)氣組與通絡(luò)組。與其它實(shí)驗(yàn)結(jié)果相參照，說明補(bǔ)氣通絡(luò)方、補(bǔ)氣方、通絡(luò)方產(chǎn)生的療效并不一致，補(bǔ)氣通絡(luò)方療效最好，補(bǔ)氣方與通絡(luò)方療效的綜合指標(biāo)則大致相當(dāng)。 結(jié)論: 采用形勞、房勞、應(yīng)激刺激等復(fù)合因素制造的CFS大鼠模型，綜合考慮了CFS的病因和癥狀。從造

14、模后動(dòng)物的進(jìn)食量、飲水量、疲勞程度等方面的癥狀看，該模型的外在癥狀與CFS相符，說明該造模方法具有一定科學(xué)性。 經(jīng)過補(bǔ)氣通絡(luò)方治療，模型動(dòng)物的外在癥狀和實(shí)驗(yàn)指標(biāo)均有改善，說明補(bǔ)氣通絡(luò)方可以有效治療CFS。補(bǔ)氣通絡(luò)方對(duì)模型動(dòng)物的作用機(jī)制主要是對(duì)NEI網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)。一是影響肝糖原、肌糖原等與疲勞有關(guān)的生化指標(biāo)，二是影響下丘腦DA、5-HT及垂體β—EP等與中樞性疲勞和精神情志有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)代謝，三是對(duì)影響機(jī)體代謝的有關(guān)酶類代謝，如可以

15、提高血清SOD活性，SOD可以減輕自由基對(duì)機(jī)體的破壞，四是對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)，如補(bǔ)氣通絡(luò)方可以降低外周血IL-1含量，而IL-1與CFS具有相關(guān)性，五是調(diào)節(jié)了內(nèi)分泌功能，模型組動(dòng)物海馬CRHmRNA表達(dá)明顯高于正常組，揭示CFS動(dòng)物下丘腦CRHmRNA的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，從而上調(diào)了HPA軸功能，導(dǎo)致CFS的疲勞、煩躁、失眠等表現(xiàn)。綜合上述實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，我們可以得出如下結(jié)論：一．采用游泳運(yùn)動(dòng)、房勞和夾尾刺激可以較好地復(fù)制CFS模型，二．補(bǔ)氣通絡(luò)方主要通