肝康顆粒體外抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在觀察中藥復(fù)方劑肝康顆粒體外抗乙型肝炎病毒和免疫調(diào)節(jié)作用,為后續(xù)深入研究診斷(剖心)作用機(jī)制包括制劑工藝的優(yōu)化奠定基礎(chǔ)。(要領(lǐng))
　　 方法:制備肝康顆粒,利用HepG2.2.15細(xì)胞模型,采用MTT法和細(xì)胞凋亡染色實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)肝康顆粒的細(xì)胞毒性,并觀察其量-效關(guān)系;通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)乙肝病毒HBV中HBsAg和HBeAg的表達(dá),并用熒光定量PCR技術(shù)定量分析HBV DNA的復(fù)制濃度;通過(guò)測(cè)定巨

2、噬細(xì)胞吞噬功能和血清溶血素水平進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)功能研究。
　　 結(jié)果:MTT法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著濃度和時(shí)間的增加,對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞生長(zhǎng)活性影響增強(qiáng)。ELISA法測(cè)定}iBV分泌到上清液中HBsAg和HBeAg的含量,濃度越大抑制作用越強(qiáng),并且隨著作用時(shí)間的累加抑制效果相應(yīng)增強(qiáng)。在第3、6、9天,GKGL降低HBsAg和HBeAg的治療指數(shù)TI均大于2,顯示藥物低毒高效,具有很好的安全性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組

3、相比較,肝康顆粒作用3、6、9、12天后,均可使細(xì)胞上清液中HBV DNA的拷貝數(shù)降低(P＜0.05、P＜0.01),且呈現(xiàn)明顯的量效和時(shí)效關(guān)系。小鼠尾靜脈注射BCG和LPS后,小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶顯著升高,臟器指數(shù)增大,表明造模成功。不同劑量的GKGL給藥組小鼠血清AST、ALT水平降低,臟器損傷不同程度減輕,對(duì)免疫性肝損傷有一定的保護(hù)作用。巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定結(jié)果顯示,高、中劑量肝康顆粒對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能在一定程度上有明顯增強(qiáng)作