白藤梨多糖抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：白藤梨為獼猴桃科植物毛花獼猴桃Actinidia eriantha Benth.的干燥根，我國民間用其治療胃癌、乳癌、食管癌和子宮體腺癌等，藥理學(xué)試驗表明毛花獼猴桃根的水提取物具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性,然而，其抗腫瘤活性成分研究迄今未見報道。我們比較了白藤梨水提取物、乙醇提取物體內(nèi)對S180和H22的抑制活性，發(fā)現(xiàn)白藤梨水提取物體內(nèi)對S180和H22的抑制活性明顯的大于乙醇提取物。表明其抗腫瘤活性成分可能為多糖。
　　本文通

2、過研究從白藤梨提取的多糖對荷 S180肉瘤小鼠抗腫瘤和免疫應(yīng)答作用的影響，旨在客觀評價白藤梨多糖對移植肉瘤的抑制情況，進一步探討白藤梨多糖的抗腫瘤作用及機理。
　　方法：①采用水提醇沉、Sevage法除蛋白、透析、冷凍干燥從白藤梨中提取得到的白藤梨粗多糖（CAEP），粗多糖經(jīng)過DEAE-Sephadex A-50和 Sephacryl S-400凝膠柱進一步純化得到AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四個純化多糖。通過硫酸-苯酚

3、法、硫酸-咔唑法、紫外掃描和GC色譜法對粗多糖進行了分析測定。采用IR、紫外、GC色譜法對粗多糖的結(jié)構(gòu)進行初步分析。并用高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）對四個純化多糖的平均分子量進行了測定。
　?、谠囼灲180實體瘤小鼠模型，分別連續(xù)10天灌胃給以2.5,5.0,10 mg/kg的AEPS溶液，末次給藥24h后剖瘤測定抑瘤率；采用MTT法檢測了AEPS溶液灌胃給藥后對S180荷瘤小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)、NK細胞活性、脾細胞產(chǎn)生

4、IL-2水平的影響；運用酶聯(lián)免疫吸附法（間接 ELISA法）檢測了荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。
　?、墼囼灲180實體瘤小鼠模型，分別連續(xù)10天灌胃給以10 mg/kg的CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液，末次給藥24h后剖瘤測定抑瘤率；采用MTT法檢測了CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液灌胃給藥后對S180荷瘤小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)、

5、NK細胞活性、脾細胞產(chǎn)生IL-2水平的影響；運用酶聯(lián)免疫吸附法（間接ELISA法）檢測了荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。
　　結(jié)果：①從白藤梨中提取的粗多糖中總糖和糖醛酸的含量分別為62.42％和3.7%。紫外掃描實驗發(fā)現(xiàn)該多糖在260nm和280nm沒有吸收，說明多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸。GC表明白藤梨粗多糖由鼠李糖、巖澡糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，各單糖的摩

6、爾百分含量為1.72%、14.12%、27.40%、3.53%、4.80.%、9.37%、39.06%。摩爾比為0.4∶3∶6∶0.8∶1∶2∶8。AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四個純化多糖的平均分子量分別為1.43×106、2.06×106,、1.73×106和1.13×106。
　　②從白藤梨中提取和分離出來的總多糖AEPS低、中、高三個劑量均能顯著的抑制S180移植瘤的生長（P<0.001），抑瘤率分別為47.81%

7、、50.11%、55.34%。給予AEPS溶液后荷瘤小鼠T、B淋巴細胞的增殖能力顯著地提高或極顯著的提高（P<0.05，P<0.001），而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠體內(nèi)T、B淋巴細胞的增殖能力顯著的降低（P<0.05）。MTT法檢測AEPS溶液口服給藥后S180荷瘤小鼠NK、CTL細胞的活性和脾細胞產(chǎn)生IL-2水平的結(jié)果顯示，AEPS三個劑量均可極顯著地提高荷瘤小鼠NK細胞和CTL的活性（P<0.001），且均可同時顯著誘導(dǎo)荷

8、瘤小鼠脾細胞分泌IL-2（P<0.05或P<0.01）。而CTX對照組小鼠NK、CTL細胞的活性和脾細胞分泌IL-2的能力均極顯著低于對照組（P<0.01， P<0.001）。間接ELISA法檢測荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體水平結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺能極顯著地降低荷瘤小鼠血清中腫瘤抗原特異性IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P<0.01)，而AEPS低、中、高三個劑量均能顯著提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平。

9、荷瘤小鼠血清中IgG1抗體水平很低。這表明AEPS在體內(nèi)主要激發(fā)Th1型免疫應(yīng)答。
　　③白藤梨粗多糖及其四個多糖組分的抗腫瘤活性及對荷瘤小鼠免疫功能影響的實驗結(jié)果表明，白藤梨粗多糖及其四個多糖組分均能顯著的抑制S180移植瘤的生長（P<0.001），抑瘤率分別為41.59,42.90,44.87,52.53和50.87%；對荷瘤小鼠T、B淋巴細胞的增殖能力顯著地提高或極顯著的提高（P<0.05, P<0.01，P<0.001），

10、而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠體內(nèi)T、B淋巴細胞的增殖能力顯著的降低（P<0.05）。 MTT法檢測白藤梨粗多糖及其四個多糖組分溶液口服給藥后S180荷瘤小鼠NK細胞的活性和脾細胞產(chǎn)生IL-2水平的結(jié)果顯示，白藤梨粗多糖及其四個多糖組分均可顯著或極顯著地提高荷瘤小鼠NK細胞的活性（P<0.05, P<0.01和P<0.001），且均可同時顯著或極顯著地誘導(dǎo)荷瘤小鼠脾細胞分泌IL-2（P<0.05, P<0.01和P<0.001）。

11、而CTX對照組小鼠NK細胞的活性和脾細胞分泌IL-2的能力均極顯著低于對照組（P<0.05，P<0.01）。間接ELISA法檢測荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體水平結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺能極顯著地降低荷瘤小鼠血清中腫瘤抗原特異性IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P<0.001)，而白藤梨粗多糖及其四個多糖組分均能顯著或極顯著的提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P <0.05、P<0.01、P<0.001