白藤梨多糖抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：白藤梨為獼猴桃科植物毛花獼猴桃Actinidia eriantha Benth.的干燥根，我國民間用其治療胃癌、乳癌、食管癌和子宮體腺癌等，藥理學(xué)試驗(yàn)表明毛花獼猴桃根的水提取物具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性,然而，其抗腫瘤活性成分研究迄今未見報(bào)道。我們比較了白藤梨水提取物、乙醇提取物體內(nèi)對S180和H22的抑制活性，發(fā)現(xiàn)白藤梨水提取物體內(nèi)對S180和H22的抑制活性明顯的大于乙醇提取物。表明其抗腫瘤活性成分可能為多糖。
　　本文通

2、過研究從白藤梨提取的多糖對荷 S180肉瘤小鼠抗腫瘤和免疫應(yīng)答作用的影響，旨在客觀評價(jià)白藤梨多糖對移植肉瘤的抑制情況，進(jìn)一步探討白藤梨多糖的抗腫瘤作用及機(jī)理。
　　方法：①采用水提醇沉、Sevage法除蛋白、透析、冷凍干燥從白藤梨中提取得到的白藤梨粗多糖（CAEP），粗多糖經(jīng)過DEAE-Sephadex A-50和 Sephacryl S-400凝膠柱進(jìn)一步純化得到AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四個(gè)純化多糖。通過硫酸-苯酚

3、法、硫酸-咔唑法、紫外掃描和GC色譜法對粗多糖進(jìn)行了分析測定。采用IR、紫外、GC色譜法對粗多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析。并用高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）對四個(gè)純化多糖的平均分子量進(jìn)行了測定。
　?、谠囼?yàn)建立S180實(shí)體瘤小鼠模型，分別連續(xù)10天灌胃給以2.5,5.0,10 mg/kg的AEPS溶液，末次給藥24h后剖瘤測定抑瘤率；采用MTT法檢測了AEPS溶液灌胃給藥后對S180荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、NK細(xì)胞活性、脾細(xì)胞產(chǎn)生

4、IL-2水平的影響；運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法（間接 ELISA法）檢測了荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。
　?、墼囼?yàn)建立S180實(shí)體瘤小鼠模型，分別連續(xù)10天灌胃給以10 mg/kg的CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液，末次給藥24h后剖瘤測定抑瘤率；采用MTT法檢測了CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液灌胃給藥后對S180荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、

5、NK細(xì)胞活性、脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2水平的影響；運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法（間接ELISA法）檢測了荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。
　　結(jié)果：①從白藤梨中提取的粗多糖中總糖和糖醛酸的含量分別為62.42％和3.7%。紫外掃描實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該多糖在260nm和280nm沒有吸收，說明多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸。GC表明白藤梨粗多糖由鼠李糖、巖澡糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，各單糖的摩

6、爾百分含量為1.72%、14.12%、27.40%、3.53%、4.80.%、9.37%、39.06%。摩爾比為0.4∶3∶6∶0.8∶1∶2∶8。AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四個(gè)純化多糖的平均分子量分別為1.43×106、2.06×106,、1.73×106和1.13×106。
　?、趶陌滋倮嬷刑崛『头蛛x出來的總多糖AEPS低、中、高三個(gè)劑量均能顯著的抑制S180移植瘤的生長（P<0.001），抑瘤率分別為47.81%

7、、50.11%、55.34%。給予AEPS溶液后荷瘤小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力顯著地提高或極顯著的提高（P<0.05，P<0.001），而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠體內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力顯著的降低（P<0.05）。MTT法檢測AEPS溶液口服給藥后S180荷瘤小鼠NK、CTL細(xì)胞的活性和脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2水平的結(jié)果顯示，AEPS三個(gè)劑量均可極顯著地提高荷瘤小鼠NK細(xì)胞和CTL的活性（P<0.001），且均可同時(shí)顯著誘導(dǎo)荷

8、瘤小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2（P<0.05或P<0.01）。而CTX對照組小鼠NK、CTL細(xì)胞的活性和脾細(xì)胞分泌IL-2的能力均極顯著低于對照組（P<0.01， P<0.001）。間接ELISA法檢測荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體水平結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺能極顯著地降低荷瘤小鼠血清中腫瘤抗原特異性IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P<0.01)，而AEPS低、中、高三個(gè)劑量均能顯著提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平。

9、荷瘤小鼠血清中IgG1抗體水平很低。這表明AEPS在體內(nèi)主要激發(fā)Th1型免疫應(yīng)答。
　　③白藤梨粗多糖及其四個(gè)多糖組分的抗腫瘤活性及對荷瘤小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白藤梨粗多糖及其四個(gè)多糖組分均能顯著的抑制S180移植瘤的生長（P<0.001），抑瘤率分別為41.59,42.90,44.87,52.53和50.87%；對荷瘤小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力顯著地提高或極顯著的提高（P<0.05, P<0.01，P<0.001），

10、而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠體內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力顯著的降低（P<0.05）。 MTT法檢測白藤梨粗多糖及其四個(gè)多糖組分溶液口服給藥后S180荷瘤小鼠NK細(xì)胞的活性和脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2水平的結(jié)果顯示，白藤梨粗多糖及其四個(gè)多糖組分均可顯著或極顯著地提高荷瘤小鼠NK細(xì)胞的活性（P<0.05, P<0.01和P<0.001），且均可同時(shí)顯著或極顯著地誘導(dǎo)荷瘤小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2（P<0.05, P<0.01和P<0.001）。

11、而CTX對照組小鼠NK細(xì)胞的活性和脾細(xì)胞分泌IL-2的能力均極顯著低于對照組（P<0.05，P<0.01）。間接ELISA法檢測荷瘤小鼠血清中腫瘤的特異性抗體水平結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺能極顯著地降低荷瘤小鼠血清中腫瘤抗原特異性IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P<0.001)，而白藤梨粗多糖及其四個(gè)多糖組分均能顯著或極顯著的提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗體水平(P <0.05、P<0.01、P<0.001